[發明專利]一種檢測全血中免疫抑制劑藥物的方法

在審

• 申請號: 202110240210.8
• 申請日: 2021-03-04
• 公開（公告）號: CN113049726A
• 公開（公告）日: 2021-06-29
• 發明（設計）人: 馮振;景葉松;弭兆元
• 申請（專利權）人: 山東英盛生物技術有限公司
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/72
• 代理公司: 濟南圣達知識產權代理有限公司 37221
• 代理人: 孫維傲

1.一種檢測全血中免疫抑制劑藥物的方法，所述免疫抑制藥物為依維莫司和西羅莫司，其特征在于，所述方法包括對全血樣品進行提取后采用HPLC-MS法檢測分析，其中，提取液為三氟醋酸和氟化銨的甲酸溶液。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，提取液中三氟醋酸體積分數為0.01-0.05％，氟化銨的濃度為0.1-0.5mM。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述提取方法包括：使用提取液對全血進行提取后渦旋離心取上清液氮吹濃縮至吹干，然后加入復溶液進行復溶。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述復溶液為含有三氟醋酸和氟化銨的甲醇/水混合溶液。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，復溶液中水與甲醇的體積比為7:7-7:1；

優選地，復溶液中三氟醋酸體積分數為0.01-0.05％，氟化銨的濃度為0.1-0.5mM。

6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，HPLC-MS分析時，流動相A為含有三氟醋酸和氟化銨的HPLC級水，流動相B為含有三氟醋酸和氟化銨的甲醇。

7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，流動相A和B中含有的三氟醋酸的體積分數為0.01-0.05％，氟化銨的濃度為0.1-0.5mM。

8.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，色譜條件為：

色譜柱：ZORBAX SB C18(2.1mm×50mm,3.5μm)；

柱溫：40-70℃；

流動相A：0.025％三氟醋酸和0.4mM氟化銨的HPLC級水，流動相B：0.025％三氟醋酸和0.4mM氟化銨的甲醇；

梯度洗脫條件：0-1.0min，2％流動相B；1.0-1.1min，2％-98％流動相B；1.1-3.5min，98％流動相B；3.5-3.6min，98％-2％流動相B；3.6-5min，2％流動相B。

流速：0.2-0.5mL/min；

進樣量2-8uL。

9.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，質譜條件：采用正離子電噴霧離子化的多離子反應監測模式，噴霧電壓4000V：去溶劑溫度：315℃，采用MRM模式采集數據；

優選地，分析物依維莫司的母離子為975.512m/z，子離子為908.333m/z，透鏡電壓為203V，碰撞能量為15.12V；

分析物西羅莫司的母離子為931.462m/z，子離子為864.375m/z，透鏡電壓為180V，碰撞能量為18.95V。

10.一種檢測全血中免疫抑制劑藥物的試劑盒，所述免疫抑制藥物為依維莫司和西羅莫司，其特征在于，包括提取液、復溶液和流動相溶液；

所述提取液為三氟醋酸和氟化銨的甲酸溶液；優選地，提取液中三氟醋酸體積分數為0.01-0.05％，氟化銨的濃度為0.1-0.5mM；

所述復溶液為含有三氟醋酸和氟化銨的甲醇/水混合溶液；優選地，復溶液中水與甲醇的體積比為7:7-7:1；優選地，復溶液中三氟醋酸體積分數為0.01-0.05％，氟化銨的濃度為0.1-0.5mM；

所述流動相溶液為：流動相A為含有三氟醋酸和氟化銨的HPLC級水，流動相B為含有三氟醋酸和氟化銨的甲醇；優選地，流動相A和B中含有的三氟醋酸的體積分數為0.01-0.05％，氟化銨的濃度為0.1-0.5mM。