[發明專利]一種牛源性成分的LAMP檢測方法

在審

• 申請號: 202110239002.6
• 申請日: 2021-03-04
• 公開（公告）號: CN112795665A
• 公開（公告）日: 2021-05-14
• 發明（設計）人: 楊立桃
• 申請（專利權）人: 上海交通大學蘇北研究院
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/6844
• 代理公司: 寧波華拓同億專利代理事務所(普通合伙) 33432
• 代理人: 南夢怡

1.一種牛源性成分的LAMP檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

a)設計合成引物；所述引物由上游內部引物FIP、下游內部引物BIP、上游外部引物F3和下游外部引物B3組成，所述引物的堿基序列如SEQ ID No：1～4；

b)制備18種不同的動物和植物，即豬、綿羊、山羊、驢、馬、騾子、貓、鼠、雞、鴨、鵝、水稻、擬南芥、玉米、大豆、小麥、大麥和棉籽的DNA稀釋液；

c)配制LAMP反應體系并設定反應條件；

d)進行LAMP方法特異性檢測；

e)進行LAMP方法靈敏度檢測。

2.根據權利要求1所述的牛源性成分的LAMP檢測方法，其特征在于，步驟b)中，所述DNA稀釋液的濃度為20ng/μL。

3.根據權利要求1所述的牛源性成分的LAMP檢測方法，其特征在于，步驟c)中，所述LAMP反應體系的配置方法為：將2μL的DNA稀釋液加入到23μL反應體系中；

所述23μL的反應體系包括以下體積含量的各組分：

LAMP反應條件為：65℃擴增反應1h，1個循環；80℃使酶失活5min、4℃降溫5min，1個循環。

4.根據權利要求1所述的牛源性成分LAMP特異性檢測方法，其特征在于，步驟d)中，陽性樣品為4種不同品種的牛，分別是北美野牛、奶牛、牦牛和水牛，陰性樣品為18種不同的動物和植物，分別是豬、綿羊、山羊、驢、馬、騾子、貓、鼠、雞、鴨、鵝、水稻、擬南芥、玉米、大豆、小麥、大麥和棉籽，并用ddH₂O設置陰性對照。

5.根據權利要求1所述的牛源性成分LAMP靈敏度檢測方法，其特征在于，步驟e)中，先將牦牛DNA模板稀釋成7個濃度梯度(20ng/μL、10ng/μL、2ng/μL、1ng/μL、0.2ng/μL、0.02ng/μL、0.002ng/μL)，再用LAMP方法進行靈敏度測試。

6.根據權利要求1所述的牛源性成分LAMP特異性檢測方法，其特征在于，對步驟d)中的擴增產物首先進行2％瓊脂糖凝膠電泳，200V，25min。2％瓊脂糖凝膠電泳出梯狀條帶的為牛屬的樣品，無條帶的為其他樣品或空白對照。

7.根據權利要求1所述的牛源性成分LAMP靈敏度檢測方法，其特征在于，對步驟e)中的擴增產物進行2％瓊脂糖凝膠電泳，200V，25min。出現梯狀條帶對應的最低拷貝數就是該檢測方法的檢測下限(limit of detection，LOD)。