[發明專利]基于RT-RAA技術檢測雞傳染性法氏囊病病毒的引物探針組合及試劑盒

在審

• 申請號: 202110238934.9
• 申請日: 2021-03-04
• 公開（公告）號: CN112760424A
• 公開（公告）日: 2021-05-07
• 發明（設計）人: 馬廣斌;鄒海濤;李陽;馬麗;宋金棟;宋美瑩;李廣森;王永堅;鹿洪偉
• 申請（專利權）人: 山東信達基因科技有限公司;山東信得科技股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 北京同輝知識產權代理事務所(普通合伙) 11357
• 代理人: 于晶晶

1.一種基于RT-RAA技術檢測雞傳染性法氏囊病病毒的引物探針組合，所述引物包括上游引物和下游引物，其特征在于，所述上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示或如SEQID NO:2所示，所述下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示或如SEQ ID NO:4所示，所述探針的核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示，其中，探針的5′端第4位T堿基標記羧基熒光素，第4位堿基后連接脫堿基位點四氫呋喃，第7位堿基標記BHQ1淬滅基團，3′端進行C3-spacer阻斷修飾。

2.根據權利要求1所述的基于RT-RAA技術檢測雞傳染性法氏囊病病毒的引物探針組合，其特征在于，引物探針組合中的引物和探針是以雞傳染性法氏囊病病毒的A片段VP2基因為目的基因進行設計獲得，其中，如SEQ ID NO:1所示的上游引物為對應雞傳染性法氏囊病病毒的A片段VP2基因的第1216位堿基前后的核苷酸序列，且所述上游引物的核苷酸序列中與雞傳染性法氏囊病病毒的A片段VP2基因第1216位堿基對應的堿基設為簡并堿基K，如SEQ ID NO:2所示的所述上游引物的核苷酸序列為對應雞傳染性法氏囊病病毒的A片段VP2基因的第1236位堿基前后的核苷酸序列，且所述上游引物的核苷酸序列中與雞傳染性法氏囊病病毒的A片段VP2基因第1236位堿基對應的堿基設為簡并堿基Y，如SEQ ID NO:3所示的下游引物的核苷酸序列為對應雞傳染性法氏囊病病毒的A片段VP2基因的第1384位堿基前后的核苷酸序列的反向互補序列，且下游引物的核苷酸序列中與雞傳染性法氏囊病病毒的A片段VP2基因第1384位堿基對應的堿基設為簡并堿基R。

3.根據權利要求1所述的基于RT-RAA技術檢測雞傳染性法氏囊病病毒的引物探針組合，其特征在于，所述上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示，所述下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示。

4.根據權利要求1所述的基于RT-RAA技術檢測雞傳染性法氏囊病病毒的引物探針組合，其特征在于，所述上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示，所述下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示。

5.根據權利要求1所述的基于RT-RAA技術檢測雞傳染性法氏囊病病毒的引物探針組合，其特征在于，所述上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，所述下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示。

6.根據權利要求3-5任意一項所述的基于RT-RAA技術檢測雞傳染性法氏囊病病毒的引物探針組合，其特征在于，所述引物探針組合應用在非疾病診斷目的的基于RT-RAA技術檢測雞傳染性法氏囊病病毒的檢測中，且基于RT-RAA技術檢測雞傳染性法氏囊病病毒的檢測方法包括如下步驟：

（1）配置陰性對照、陽性對照以及待檢測樣品的RAA反應體系，其中，RAA反應體系中所使用的引物探針組合為權利要求3-5任意一項所述的引物探針組合；

（2）RAA反應體系擴增；

（3）根據RAA反應體系的擴增曲線判定待測樣品中是否含有雞傳染性法氏囊病病毒，待測樣品中是否含有雞傳染性法氏囊病病毒的判定方式為：

在陰性對照RAA反應體系經擴增反應后無擴增曲線，且陽性對照RAA反應體系經擴增反應后出現擴增曲線的前提下，待檢測樣品的RAA反應體系擴增反應后具有擴增曲線，則樣品為陽性，待檢測樣品的RAA反應體系擴增反應后無擴增曲線，則樣品為陰性。

7.一種基于RT-RAA技術檢測雞傳染性法氏囊病病毒的試劑盒，其特征在于，包括權利要求3-5任意一項所述的引物探針組合。

8.根據權利要求7所述的基于RT-RAA技術檢測雞傳染性法氏囊病病毒的試劑盒，其特征在于，還包括RT-RAA反應的試劑。