[發(fā)明專利]基于RT-RAA技術(shù)檢測雞傳染性法氏囊病病毒的引物探針組合及試劑盒

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110238934.9
• 申請日: 2021-03-04
• 公開（公告）號: CN112760424A
• 公開（公告）日: 2021-05-07
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 馬廣斌;鄒海濤;李陽;馬麗;宋金棟;宋美瑩;李廣森;王永堅;鹿洪偉
• 申請（專利權(quán)）人: 山東信達基因科技有限公司;山東信得科技股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 北京同輝知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11357
• 代理人: 于晶晶

本發(fā)明公開一種基于RT?RAA技術(shù)檢測雞傳染性法氏囊病病毒的引物探針組合及試劑盒，所述引物探針組合中的引物和探針是以雞傳染性法氏囊病病毒的A片段VP2基因為目的基因進行設(shè)計獲得，所述引物探針組合應(yīng)用在基于RT?RAA技術(shù)檢測雞傳染性法氏囊病病毒的檢測中。本發(fā)明中引物探針組合的設(shè)計實現(xiàn)了雞傳染性法氏囊病病毒能夠通過RT?RAA技術(shù)進行快速、準(zhǔn)確的檢測，彌補了現(xiàn)有傳統(tǒng)檢測技術(shù)的不足，非常適用于現(xiàn)場快速檢測，與RT?PCR法相比，RT?RAA法是在恒溫下反應(yīng)，操作簡單，擺脫了復(fù)雜儀器的束縛，不需變溫，大大縮短了反應(yīng)時間。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及雞傳染性法氏囊病病毒檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體地說涉及一種基于RT-RAA技術(shù)檢測雞傳染性法氏囊病病毒的引物探針組合及試劑盒。

背景技術(shù)

傳染性法氏囊病病毒感染雞導(dǎo)致傳染性法氏囊病，具有感染性強、傳播速度快、發(fā)病率和死亡率高等特點。主要以侵害雛雞淋巴組織，特別是中樞免疫器官—法氏囊，導(dǎo)致機體的免疫抑制。近年來，隨著雞傳染性法氏囊病超強毒（Veryvirulent infectiousbursaldisease virus，vvIBDV）的出現(xiàn)，能夠使疫苗免疫失敗，目前有效的防治手段有卵黃抗體等，雞傳染性法氏囊病已經(jīng)成為能夠廣泛對世界性包括我國在內(nèi)的養(yǎng)禽業(yè)造成經(jīng)濟損失的重要病原之一，以法氏囊發(fā)炎、壞死、萎縮和法氏囊內(nèi)淋巴細(xì)胞嚴(yán)重受損為特征，從而引起雞的免疫機能障礙，干擾各種疫苗的免疫效果。所以，對雞傳染性法氏囊病的防控與診治提出了更高的要求，對雞傳染性法氏囊病進行早期準(zhǔn)確的診斷具有相當(dāng)重要的意義和價值。到目前為止，我國有關(guān)雞傳染性法氏囊病的標(biāo)準(zhǔn)有２個，但缺少必要的快速分子生物學(xué)診斷方法。

針對上述問題，特提出本發(fā)明。

發(fā)明內(nèi)容

針對現(xiàn)有技術(shù)的種種不足，為了解決上述問題，現(xiàn)提出一種基于RT-RAA技術(shù)檢測雞傳染性法氏囊病病毒的引物探針組合及試劑盒。為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：

一種基于RT-RAA技術(shù)檢測雞傳染性法氏囊病病毒的引物探針組合，所述引物包括上游引物和下游引物，所述上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示或如SEQ ID NO:2所示，所述下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示或如SEQ ID NO:4所示，所述探針的核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示，其中，探針的5′端第4位T堿基標(biāo)記羧基熒光素，第4位堿基后連接脫堿基位點四氫呋喃，第7位堿基標(biāo)記BHQ1淬滅基團，3′端進行C3-spacer阻斷修飾。

優(yōu)選的，引物探針組合中的引物和探針是以雞傳染性法氏囊病病毒的A片段VP2基因為目的基因進行設(shè)計獲得，其中，如SEQ ID NO:1所示的上游引物為對應(yīng)雞傳染性法氏囊病病毒的A片段VP2基因的第1216位堿基前后的核苷酸序列，且所述上游引物的核苷酸序列中與雞傳染性法氏囊病病毒的A片段VP2基因第1216位堿基對應(yīng)的堿基設(shè)為簡并堿基K，如SEQ ID NO:2所示的所述上游引物的核苷酸序列為對應(yīng)雞傳染性法氏囊病病毒的A片段VP2基因的第1236位堿基前后的核苷酸序列，且所述上游引物的核苷酸序列中與雞傳染性法氏囊病病毒的A片段VP2基因第1236位堿基對應(yīng)的堿基設(shè)為簡并堿基Y，如SEQ ID NO:3所示的下游引物的核苷酸序列為對應(yīng)雞傳染性法氏囊病病毒的A片段VP2基因的第1384位堿基前后的核苷酸序列的反向互補序列，且下游引物的核苷酸序列中與雞傳染性法氏囊病病毒的A片段VP2基因第1384位堿基對應(yīng)的堿基設(shè)為簡并堿基R。

優(yōu)選的，所述上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示，所述下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示。

優(yōu)選的，所述上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示，所述下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示。

優(yōu)選的，所述上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，所述下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示。