[發明專利]植物葉片DNA提取裂解緩沖液、植物葉片DNA快速提取的方法及應用

在審

• 申請號: 202110238870.2
• 申請日: 2021-03-04
• 公開（公告）號: CN112899267A
• 公開（公告）日: 2021-06-04
• 發明（設計）人: 陳慶春;黃剛;陳永佳;黃蘋;劉家勁;汪杰;侯軍亮;余慷
• 申請（專利權）人: 阜陽華大生命科學研究院
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 北京細軟智谷知識產權代理有限責任公司 11471
• 代理人: 劉靜榮

本發明屬于生物技術領域，具體涉及植物葉片DNA提取裂解緩沖液、植物葉片DNA快速提取的方法及應用。本發明的植物葉片DNA提取裂解緩沖液，包括以下組分：65～75mM Tris?HCl、30～40mM EDTA，提取裂解緩沖液的pH為8.0。本發明優化植物裂解液，將新鮮植物葉片直接進行裂解，整個提取過程只有1次加液、1次加熱1次離心、并在1管中完成，其余步驟均省略，離心后取上清液即可進行常規的分子生物學實驗操作，且提取出的DNA進行PCR擴增效果穩定。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及植物葉片DNA提取裂解緩沖液、植物葉片DNA快速提取的方法及應用。

背景技術

在植物分子實驗工作中，經常需要對大量材料進行DNA提取。植物DNA提取已經具備成熟的傳統方法，如CTAB法。CTAB法是一種快速簡便的提取植物基因組DNA的方法，其原理是：采用機械破碎植物細胞，然后加入CTAB分離緩沖液將DNA溶解出來，再經氯仿－異戊醇抽提除去蛋白質，最后得到DNA。但常規CTAB植物葉片DNA提取方法步驟多、操作繁雜，需要經歷凍干、研磨、裂解、抽提、純化、溶解等步驟，其中有些步驟需要用到多種有毒的有機溶劑，整個提取過程成本較高、操作繁雜，且花費較多時間。

發明內容

本發明的目的在于提供一種植物葉片DNA提取裂解緩沖液。

本發明的再一目的在于提供植物葉片DNA快速提取的方法。

本發明的再一目的在于提供上述植物葉片DNA提取裂解緩沖液的應用。

根據本發明具體實施方式的植物葉片DNA提取裂解緩沖液，所述提取裂解緩沖液包括以下組分：65～75mM Tris-HCl、30～40mM EDTA，提取裂解緩沖液的pH為8.0。

根據本發明具體實施方式的植物葉片DNA提取裂解緩沖液，所述提取裂解緩沖液包括以下組分：70mM Tris-HCl、35mM EDTA，pH為8.0。

根據本發明具體實施方式的植物葉片DNA快速提取的方法，所述方法包括以下步驟：

(1)取植物新鮮葉片，置于離心管中；優選的，用打孔器取植物新鮮葉片得到直徑為1cm的圓形葉片；

(2)將所述離心管中加入150μL提取裂解緩沖液，其中，所述提取裂解緩沖液包括以下組分：65～75mM Tris-HCl、30～40mM EDTA，pH為8.0；

(3)研磨葉片；

(4)加熱后，離心；

(5)取上清液，得到植物葉片DNA。

步驟(1)中，用0.6cm的打孔器取植物新鮮葉片(直徑為1cm的圓形葉片) 或者直接用剪刀或刀片取葉片1cm╳0.5cm放入2mL EP管中。

根據本發明具體實施方式的植物葉片DNA快速提取的方法，步驟(2)中，所述離心管中還加入鋼珠；優選的，加入的鋼珠的數量為1個，鋼珠的直徑為 4mm；或者加入的鋼珠的數量為2個或2個以上，鋼珠的直徑為1～3mm。

將鋼珠加入裂解液中，直接進行震蕩破碎葉片的細胞壁，可有效地配合裂解液完成對植物葉片細胞的破碎，有利于葉片中DNA被釋放到上清液中；裂解提取液中還可加入其它材質的微球、或采用超聲波等其它可以破碎細胞壁的方法，以達到破碎細胞壁的效果。

根據本發明具體實施方式的植物葉片DNA快速提取的方法，步驟(3)中，將離心管在組織研磨儀上研磨20～60s。

根據本發明具體實施方式的植物葉片DNA快速提取的方法，步驟(4)中，將離心管在85～95℃水浴條件下加熱5～15min，取出后，10000～1200rpm離心1～3min。