[發(fā)明專利]一種利用棕櫚油提取物分離純化發(fā)酵液中維生素K2的方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 202110238737.7 | 申請日： | 2021-03-04 |
| 公開（公告）號： | CN113004134B | 公開（公告）日： | 2023-04-07 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 鄭之明;馬國良;王鵬;王麗;王晗;趙根海;丁秀敏;楊強 | 申請（專利權(quán)）人： | 中國科學(xué)院合肥物質(zhì)科學(xué)研究院 |
| 主分類號： | C07C46/10 | 分類號： | C07C46/10;C07C50/14 |
| 代理公司： | 蘇州翔遠(yuǎn)專利代理事務(wù)所(普通合伙) 32251 | 代理人： | 王華 |
| 地址： | 23000*** | 國省代碼： | 安徽;34 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 利用 棕櫚油 提取物 分離 純化 發(fā)酵 維生素 k2 方法 | ||
一種利用棕櫚油提取物分離純化發(fā)酵液中維生素K2的方法，對發(fā)酵液進行分離得到濕菌體，再冷凍干燥得到干菌體，將干菌體與棕櫚油提取物混合2~4h，離心取上清液；將已經(jīng)預(yù)處理的大孔樹脂進行裝柱，將上清液置于充滿大孔樹脂的分離柱中，使用第一洗脫劑除去雜油類物質(zhì)，然后使用第一解析劑將維生素K2從大孔樹脂上洗脫下來得到洗脫液；得到的洗脫液進行濃縮得到濃縮液；將所述濃縮液置于容納有反相硅膠的分離柱中，以第二洗脫劑除去雜質(zhì)，再用第二解析劑洗脫，得到高純度維生素K2產(chǎn)品，進行冷凍結(jié)晶即得到維生素K2晶體。本發(fā)明使用的棕櫚油提取物存在于自然界中，獲取較為簡單且不會產(chǎn)生有機廢液，大大減少對環(huán)境的污染。
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明屬于生物化學(xué)工程領(lǐng)域，涉及一種利用棕櫚油提取物分離純化發(fā)酵液中維生素K2的方法，特別涉及利用棕櫚油提取物(如中鏈甘油三酯)和乙酸丁酯等試劑作為溶媒綠色高效的提取納豆芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌中的維生素K2的方法。
背景技術(shù)
維生素K2是2-甲基-3-烷基-1,4-萘醌的系列衍生物，根據(jù)C-3位置上異戊二烯個數(shù)的不同，可被分為14種，用MK-n表示(n指側(cè)鏈上異戊二烯單元的個數(shù))。隨著對維生素K2功能研究的深入，發(fā)現(xiàn)它不僅能夠促進血液的凝固、防治骨質(zhì)疏松，還對神經(jīng)退行性疾病及多種腫瘤具有較好的預(yù)治作用。在日本和歐美，早已經(jīng)作為功能性食品和藥品進行銷售，預(yù)計到2025年維生素K的銷售額將達(dá)到80多億美元，市場前景廣闊。
由于天然獲得維生素K2和化學(xué)合成維生素K2兩種方法具有產(chǎn)率較低，副產(chǎn)物多，反應(yīng)條件復(fù)雜等問題，目前效果較好的維生素K2生產(chǎn)方法為微生物發(fā)酵法，納豆芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌通過發(fā)酵之后產(chǎn)生大量的維生素K2，為了獲得高純度的MK-7，需將其從原料中分離出來，并應(yīng)用各種純化技術(shù)獲得高純度的VK2產(chǎn)品。分離純化是生物加工過程中成本最大的一部分，微生物發(fā)酵獲得的產(chǎn)品一般先經(jīng)過濃縮，離心，干燥等方法處理，再通過大量有機試劑提取與純化獲得不同純度的樣品。以往使用的分離純化溶劑大多為甲醇，四氫呋喃、二氯甲烷等毒性較高的有機試劑作為溶媒，需要多步操作才能獲得純度較高的維生素K2，在此過程中污染嚴(yán)重，產(chǎn)生大量廢液，操作復(fù)雜，成本較高，且得到的產(chǎn)品無法直接用于人體食用。因此，使用天然油脂和綠色有機試劑高效低成本的分離純化技術(shù)在維生素K2工業(yè)生產(chǎn)中十分重要。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的利用棕櫚油提取物(中鏈甘油三酯)作為溶媒提取納豆芽孢桿菌或枯草芽孢桿菌干菌體內(nèi)的維生素K2，之后利用乙醇以及乙酸丁酯為分離純化的溶劑，兩步法綠色高效的獲得高純度維生素K2。
為實現(xiàn)上述目的及其他相關(guān)目的，本發(fā)明提供的技術(shù)方案是：一種利用棕櫚油提取物分離純化發(fā)酵液中維生素K2的方法，包括下列步驟：
步驟1：對微生物發(fā)酵生產(chǎn)法得到的發(fā)酵液進行分離得到濕菌體，再將濕菌體冷凍干燥得到富含維生素K2的干菌體；
步驟2：將干菌體與棕櫚油提取物混合2～4h，然后對混合液離心取上清液，得到的上清液即為富含維生素K2的棕櫚油提取物；
步驟3：將已經(jīng)預(yù)處理的大孔樹脂進行裝柱，將富含維生素K2的棕櫚油提取物置于充滿大孔樹脂的分離柱中，使用第一洗脫劑除去雜油類物質(zhì)，然后使用第一解析劑將維生素K2從大孔樹脂上洗脫下來得到洗脫液；
步驟4：對步驟3得到的洗脫液進行濃縮得到濃縮液；
步驟5：將所述濃縮液置于容納有反相硅膠的分離柱中，以第二洗脫劑除去雜質(zhì)，再用第二解析劑洗脫，得到高純度維生素K2產(chǎn)品；
步驟6：對高濃度維生素K2溶液進行冷凍結(jié)晶，即得到維生素K2晶體。
優(yōu)選的技術(shù)方案為：干菌體與棕櫚油提取物的質(zhì)量比例為1:1～1:20。
優(yōu)選的技術(shù)方案為：步驟2中，將干菌體與棕櫚油提取物混合后，置于搖床上以轉(zhuǎn)速200～300rpm/min，處理2～4h。
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