[發明專利]一種利用棕櫚油提取物分離純化發酵液中維生素K2的方法

有效

• 申請號: 202110238737.7
• 申請日: 2021-03-04
• 公開（公告）號: CN113004134B
• 公開（公告）日: 2023-04-07
• 發明（設計）人: 鄭之明;馬國良;王鵬;王麗;王晗;趙根海;丁秀敏;楊強
• 申請（專利權）人: 中國科學院合肥物質科學研究院
• 主分類號: C07C46/10
• 分類號: C07C46/10;C07C50/14
• 代理公司: 蘇州翔遠專利代理事務所(普通合伙) 32251
• 代理人: 王華

1.一種利用棕櫚油提取物分離純化發酵液中維生素K2的方法，其特征在于：包括下列步驟：

步驟1：對微生物發酵生產法得到的納豆芽孢桿菌發酵液或枯草芽孢桿菌發酵液進行分離得到濕菌體，再將濕菌體冷凍干燥得到富含維生素K2的干菌體；

步驟2：將干菌體與棕櫚油提取物混合2~4h，然后對混合液離心取上清液，得到的上清液即為富含維生素K2的棕櫚油提取物；

步驟3：將已經預處理的大孔樹脂進行裝柱，將富含維生素K2的棕櫚油提取物置于充滿大孔樹脂的分離柱中，使用第一洗脫劑除去雜油類物質，然后使用第一解析劑將維生素K2從大孔樹脂上洗脫下來得到洗脫液；

步驟4：對步驟3得到的洗脫液進行濃縮得到濃縮液；

步驟5：將所述濃縮液置于容納有反相硅膠的分離柱中，以第二洗脫劑除去雜質，再用第二解析劑洗脫，得到高純度維生素K2產品；

步驟6：對高純度維生素K2產品進行冷凍結晶，即得到維生素K2晶體；

第一洗脫劑為體積分數為80%~100%的乙醇，洗脫速率為0.01~0.015柱體積/min；第一解析劑為乙酸丁酯，洗脫速率為0.05~0.06柱體積/min；

第二洗脫劑由乙酸丁酯和乙醇按照體積比5:2組成的混合液，流速為0.001~0.0015柱體積/min；

第二解析劑由乙酸丁酯和乙醇按照體積比3:2組成的混合液，流速為0.001~0.0015柱體積/min；

所述棕櫚油提取物為中鏈甘油三酯；

所述大孔樹脂為大孔樹脂HPD417、大孔樹脂HPD722、大孔樹脂GDX-10和大孔樹脂GDX-502中的一種。

2.根據權利要求1所述的利用棕櫚油提取物分離純化發酵液中維生素K2的方法，其特征在于：干菌體與棕櫚油提取物的質量比例為1:1~1:20。

3.根據權利要求1所述的利用棕櫚油提取物分離純化發酵液中維生素K2的方法，其特征在于：步驟2中，將干菌體與棕櫚油提取物混合后，置于搖床上以轉速200~300?rpm/min，處理2~4h。

4.根據權利要求1所述的利用棕櫚油提取物分離純化發酵液中維生素K2的方法，其特征在于：步驟2中，混合液置于落地冷凍離心機，以轉速7500~9000?rpm離心10~20?min。

5.根據權利要求1所述的利用棕櫚油提取物分離純化發酵液中維生素K2的方法，其特征在于：步驟3中，先用體積分數為95%的乙醇浸泡大孔樹脂，然后打開玻璃柱的下端旋塞，將大孔樹脂沿著一玻璃棒加入玻璃柱中，裝填完畢后，輕輕敲擊玻璃柱使其裝填均勻，并使氣泡逸出。

6.根據權利要求1所述的利用棕櫚油提取物分離純化發酵液中維生素K2的方法，其特征在于：步驟4采用旋轉蒸發濃縮法，使用的儀器為旋轉蒸發儀，通過真空泵使蒸發燒瓶處于負壓狀態，密封減壓至400~600毫米汞柱，水浴加熱溫度為75℃~95℃，旋轉速度為60~120rpm/min，旋蒸至乙酸乙酯全部蒸發即可結束。

7.根據權利要求1所述的利用棕櫚油提取物分離純化發酵液中維生素K2的方法，其特征在于：步驟5中，反相硅膠需要提前在130℃~140℃的環境下烘干0.5h~2h，之后使用乙酸丁酯浸泡2h以上。