[發(fā)明專利]一種利用棕櫚油提取物分離純化發(fā)酵液中維生素K2的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110238737.7
• 申請(qǐng)日: 2021-03-04
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN113004134B
• 公開(kāi)（公告）日: 2023-04-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 鄭之明;馬國(guó)良;王鵬;王麗;王晗;趙根海;丁秀敏;楊強(qiáng)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)科學(xué)院合肥物質(zhì)科學(xué)研究院
• 主分類(lèi)號(hào): C07C46/10
• 分類(lèi)號(hào): C07C46/10;C07C50/14
• 代理公司: 蘇州翔遠(yuǎn)專利代理事務(wù)所(普通合伙) 32251
• 代理人: 王華

1.一種利用棕櫚油提取物分離純化發(fā)酵液中維生素K2的方法，其特征在于：包括下列步驟：

步驟1：對(duì)微生物發(fā)酵生產(chǎn)法得到的納豆芽孢桿菌發(fā)酵液或枯草芽孢桿菌發(fā)酵液進(jìn)行分離得到濕菌體，再將濕菌體冷凍干燥得到富含維生素K2的干菌體；

步驟2：將干菌體與棕櫚油提取物混合2~4h，然后對(duì)混合液離心取上清液，得到的上清液即為富含維生素K2的棕櫚油提取物；

步驟3：將已經(jīng)預(yù)處理的大孔樹(shù)脂進(jìn)行裝柱，將富含維生素K2的棕櫚油提取物置于充滿大孔樹(shù)脂的分離柱中，使用第一洗脫劑除去雜油類(lèi)物質(zhì)，然后使用第一解析劑將維生素K2從大孔樹(shù)脂上洗脫下來(lái)得到洗脫液；

步驟4：對(duì)步驟3得到的洗脫液進(jìn)行濃縮得到濃縮液；

步驟5：將所述濃縮液置于容納有反相硅膠的分離柱中，以第二洗脫劑除去雜質(zhì)，再用第二解析劑洗脫，得到高純度維生素K2產(chǎn)品；

步驟6：對(duì)高純度維生素K2產(chǎn)品進(jìn)行冷凍結(jié)晶，即得到維生素K2晶體；

第一洗脫劑為體積分?jǐn)?shù)為80%~100%的乙醇，洗脫速率為0.01~0.015柱體積/min；第一解析劑為乙酸丁酯，洗脫速率為0.05~0.06柱體積/min；

第二洗脫劑由乙酸丁酯和乙醇按照體積比5:2組成的混合液，流速為0.001~0.0015柱體積/min；

第二解析劑由乙酸丁酯和乙醇按照體積比3:2組成的混合液，流速為0.001~0.0015柱體積/min；

所述棕櫚油提取物為中鏈甘油三酯；

所述大孔樹(shù)脂為大孔樹(shù)脂HPD417、大孔樹(shù)脂HPD722、大孔樹(shù)脂GDX-10和大孔樹(shù)脂GDX-502中的一種。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用棕櫚油提取物分離純化發(fā)酵液中維生素K2的方法，其特征在于：干菌體與棕櫚油提取物的質(zhì)量比例為1:1~1:20。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用棕櫚油提取物分離純化發(fā)酵液中維生素K2的方法，其特征在于：步驟2中，將干菌體與棕櫚油提取物混合后，置于搖床上以轉(zhuǎn)速200~300?rpm/min，處理2~4h。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用棕櫚油提取物分離純化發(fā)酵液中維生素K2的方法，其特征在于：步驟2中，混合液置于落地冷凍離心機(jī)，以轉(zhuǎn)速7500~9000?rpm離心10~20?min。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用棕櫚油提取物分離純化發(fā)酵液中維生素K2的方法，其特征在于：步驟3中，先用體積分?jǐn)?shù)為95%的乙醇浸泡大孔樹(shù)脂，然后打開(kāi)玻璃柱的下端旋塞，將大孔樹(shù)脂沿著一玻璃棒加入玻璃柱中，裝填完畢后，輕輕敲擊玻璃柱使其裝填均勻，并使氣泡逸出。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用棕櫚油提取物分離純化發(fā)酵液中維生素K2的方法，其特征在于：步驟4采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮法，使用的儀器為旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，通過(guò)真空泵使蒸發(fā)燒瓶處于負(fù)壓狀態(tài)，密封減壓至400~600毫米汞柱，水浴加熱溫度為75℃~95℃，旋轉(zhuǎn)速度為60~120rpm/min，旋蒸至乙酸乙酯全部蒸發(fā)即可結(jié)束。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用棕櫚油提取物分離純化發(fā)酵液中維生素K2的方法，其特征在于：步驟5中，反相硅膠需要提前在130℃~140℃的環(huán)境下烘干0.5h~2h，之后使用乙酸丁酯浸泡2h以上。