[發明專利]一種恒溫發酵的液態乳酸菌及制備方法和應用

在審

• 申請號: 202110238710.8
• 申請日: 2021-03-04
• 公開（公告）號: CN112899200A
• 公開（公告）日: 2021-06-04
• 發明（設計）人: 劉顯偉;熊火印
• 申請（專利權）人: 江西格力特農牧發展有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A23K10/18;C02F3/34;C12R1/01;C12R1/25;C02F103/20
• 代理公司: 北京八月瓜知識產權代理有限公司 11543
• 代理人: 李斌

1.一種恒溫發酵的液態乳酸菌，其特征在于，包括6×10¹⁰-7×10¹⁰CFU/L的糞腸球菌、3×10¹⁰-4×10¹⁰CFU/L的植物乳桿菌、4×10¹⁰-5×10¹⁰CFU/L的戊糖片球菌和5-6g/Kg的乳酸，余量為水。

2.一種權利要求1所述的恒溫發酵的液態乳酸菌的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1.在容器中加入水，再加入植物乳桿菌和戊糖片球菌；

S2.再加入培養基，進行攪拌，加熱，保持恒溫，進行擴培；

S3.當pH值降到4.5時，關閉加熱；

S4.再加入糞腸球菌攪拌，制備完成。

3.根據權利要求2所述的恒溫發酵的液態乳酸菌的制備方法，其特征在于，步驟S1中植物乳桿菌的濃度為5×10⁷-6×10⁷CFU/L，戊糖片球菌的濃度為5×10⁷-6×10⁷CFU/L。

4.根據權利要求3所述的恒溫發酵的液態乳酸菌的制備方法，其特征在于，所述植物乳桿菌和戊糖片球菌的小腸上皮粘膜定植力均大于81％，所述小腸上皮粘膜定植力測試的實驗過程為:打開動物腹腔，無菌取空腸回腸，用無菌生理鹽水沖洗腸腔，剪開，取粘液，保存備用，取12孔細胞培養板，實驗組各加粘液，每種粘液平行3個孔，過夜固定，然后每孔加生理鹽水洗滌，除去未粘附的粘液，每孔加等量植物乳桿菌或戊糖片球菌的菌懸液，每孔粘液與菌懸液等體積，另以植物乳桿菌或戊糖片球菌的菌懸液作陽性對照，進行孵育，除陽性對照外，再用生理鹽水洗去未粘附細菌，將吸出的懸液和每次的洗滌液都裝入離心管中，以備計數，計算出未粘附的總菌量，最后計算出該菌粘附的百分率即為所述植物乳桿菌或戊糖片球菌的小腸上皮粘膜定植力。

5.根據權利要求3所述的恒溫發酵的液態乳酸菌的制備方法，其特征在于，所述植物乳桿菌和戊糖片球菌在pH＝3、3小時的存活率均大于72％，在pH＝2.5、3小時的存活率均大于66％；

所述植物乳桿菌和戊糖片球菌在0.2％膽鹽濃度的存活率均高于86％，在0.3％膽鹽濃度的存活率均高于80％。

6.根據權利要求2所述的恒溫發酵的液態乳酸菌的制備方法，其特征在于，步驟S2中所述培養基包括以下重量百分數的組分：紅糖35％-55％、工業級蛋白胨25％-45％、酵母浸膏15％-25％、葡萄糖2.0-2.1％、磷酸氫二鉀0.2-0.25％、乙酸鈉0.5-0.6％、檸檬酸銨0.2-0.25％、硫酸鎂0.02-0.03％、硫酸錳0.05-0.06％。

7.根據權利要求6所述的恒溫發酵的液態乳酸菌的制備方法，其特征在于，步驟S2中所述培養基包括以下重量百分數的組分：紅糖42.03％、工業級蛋白胨35％、酵母浸膏20％、葡萄糖2.0％、磷酸氫二鉀0.2％、乙酸鈉0.5％、檸檬酸銨0.2％、硫酸鎂0.02％、硫酸錳0.05％；

工業級蛋白胨的指標為：以干基計總氮量≥13％，以干基計氨基氮≥2.0％，以干基計灰份≤10％，水份≤6.0％，2％水溶液pH值4.5-7.0；

所述酵母浸膏的指標為：水份≤35％，總氮≥11％，氨基酸態氮≥4％，灰份≤15％，pH值4.0-7.0。

8.根據權利要求2所述的恒溫發酵的液態乳酸菌的制備方法，其特征在于，步驟S2中所述攪拌的速度為100-150rpm。

9.根據權利要求2所述的恒溫發酵的液態乳酸菌的制備方法，步驟S2中所述加熱為加熱至36.5-37℃，恒溫溫度為36.5-37℃。

10.一種權利要求1所述的一種恒溫發酵的液態乳酸菌的應用，其特征在于，所述恒溫發酵的液態乳酸菌的應用方式為以下方式中的一種：

(1)在養殖場飲用水中添加飲用；

(2)在固體飼料中拌料使用；

(3)用于養殖場的場地殺菌，在使用時，所述恒溫發酵的液態乳酸菌與水按照重量比為1：(95-105)進行稀釋。