[發明專利]納米級AMH靶向超聲造影劑及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 202110238561.5
• 申請日: 2021-03-04
• 公開（公告）號: CN112870388A
• 公開（公告）日: 2021-06-01
• 發明（設計）人: 穆玉明;張姍;盛宗海;孟龍;關麗娜;狄娜;拜合提亞·塔依爾;王國棟;盧寒冰
• 申請（專利權）人: 新疆醫科大學第一附屬醫院
• 主分類號: A61K49/22
• 分類號: A61K49/22
• 代理公司: 烏魯木齊合縱專利商標事務所 65105
• 代理人: 周星瑩;湯潔

本發明涉及超聲造影劑技術領域，是一種納米級AMH靶向超聲造影劑及其制備方法和應用，前者按照下述方法得到：將二硬脂酰基磷脂酰膽堿、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺?聚乙二醇2000和二硬脂酰磷脂酰乙醇胺?聚乙二醇2000?生物素按比例混合得到母液，然后，將母液依次經過成膜、水化、氣體灌注、搖泡、分離、純化、親和素孵育和AMH抗體偶連后得到。本發明不僅可以增強移植卵巢組織顯影，并且穩定顯影時間至少可以持續10min，更有利于超聲圖像的觀察和檢測，還可用于移植卵巢中抗苗勒氏管激素分子的量化評價，實現了移植卵巢的解剖成像和功能成像，同時，本發明具有價格低廉,操作簡單,利于儲存,生物安全性好,效果可靠等優點。

技術領域

本發明涉及超聲造影劑技術領域，是一種納米級AMH靶向超聲造影劑及其制備方法和應用。

背景技術

卵巢組織凍存與移植技術（以下簡稱OTCP）是女性癌癥患者保存生育能力的一種有前途的治療方法。該技術通過在抗癌治療之前冷凍保存卵巢組織，并在化療結束病情控制后進行自體移植，達到了大量保存卵母細胞的目的，從而保留了生殖和內分泌功能。但是OTCP在臨床應用方面仍然存在諸多挑戰，包括移植后的解剖形態和功能變化的無創檢測和實時監測，例如：1.在移植后的早期階段常規超聲常常難以識別：卵巢組織僅移植其皮質部分。經過修剪后，在卵巢移植的小動物模型中，移植物大小約為2mm×1mm×1mm； 2.目前，在體監測移植卵巢功能的方法有限：卵巢移植后其功能的恢復是決定OTCP成功與否的關鍵因素。然而，在卵巢移植早期，病理組織學檢測仍然是判斷移植卵巢功能的金標準。

近年來，隨著靶向超聲造影劑制備技術的成熟以及高分辨率超聲成像設備的應用，超聲影像在疾病的診斷和監測方面實現了從解剖成像到分子成像巨大的轉變，已經成為國內外超聲領域研究的熱點。靶向超聲造影劑的制備是實現超聲分子影像的前提和關鍵。目前，以聲諾維為代表的商用超聲造影劑的應用為組織器官或病變組織提供了更多血流動力學信息，在腫瘤、心血管疾病中具有重要的應用價值。然而，聲諾維在分子影像的應用方面存在局限性：1. 聲諾維是微米級造影劑，僅能進行血池顯像；2.缺少組織特異性，無法實現組織特異性顯影。基于以上問題，有必要研究和制備具有卵巢組織靶向性的超聲造影劑。在卵巢組織中，抗苗勒氏管激素（Anti-Mullerian hormone，AMH）是僅由顆粒細胞特異性產生的二聚體糖蛋白，并且是目前評價卵巢儲備功能最佳的分子標記物。因此，制備納米級AMH靶向造影劑（AMH-Targeted nanobubbles，NB_AMH），一方面可提高大鼠移植卵巢的靶向顯影能力，另一方面有助于無創評價移植卵巢的功能，從而實現移植卵巢在體顯影和功能評價。

發明內容

本發明提供了一種納米級AMH靶向超聲造影劑及其制備方法和應用，克服了上述現有技術之不足，其能有效解決現有微米級造影劑存在僅能進行血池顯像和缺少組織特異性，無法實現組織特異性顯影的問題。

本發明的技術方案之一是通過以下措施來實現的：一種納米級AMH靶向超聲造影劑，所述造影劑是靶向微泡，所述靶向微泡包括脂質外殼和氣體內芯，脂質外殼的外表面連接有AMH抗體，脂質外殼包括二硬脂酰基磷脂酰膽堿（DSPC）、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000（DSPE-PEG2000）和二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000-生物素（DSPE-PEG2000-biotin），二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000-生物素（DSPE-PEG2000-biotin）連接鏈霉親和素，AMH抗體通過鏈霉親和素與脂質外殼連接在一起。

下面是對上述發明技術方案之一的進一步優化或/和改進：

上述二硬脂酰磷脂酰膽堿、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000和二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000-生物素（DSPE-PEG2000-biotin）的質量比為8.5至9.5：0.1至0.6：0.4至0.6。

上述二硬脂酰磷脂酰膽堿、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000和二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000-生物素（DSPE-PEG2000-biotin）的質量比為9：0.5：0.5。