[發明專利]納米級AMH靶向超聲造影劑及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 202110238561.5
• 申請日: 2021-03-04
• 公開（公告）號: CN112870388A
• 公開（公告）日: 2021-06-01
• 發明（設計）人: 穆玉明;張姍;盛宗海;孟龍;關麗娜;狄娜;拜合提亞·塔依爾;王國棟;盧寒冰
• 申請（專利權）人: 新疆醫科大學第一附屬醫院
• 主分類號: A61K49/22
• 分類號: A61K49/22
• 代理公司: 烏魯木齊合縱專利商標事務所 65105
• 代理人: 周星瑩;湯潔

1.一種納米級AMH靶向超聲造影劑，其特征在于所述造影劑是靶向微泡，所述靶向微泡包括脂質外殼和氣體內芯，脂質外殼的外表面連接有AMH抗體，脂質外殼包括二硬脂酰基磷脂酰膽堿、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000和二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000-生物素，二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000-生物素連接鏈霉親和素，AMH抗體通過鏈霉親和素與脂質外殼連接在一起。

2.根據權利要求1所述的納米級AMH靶向超聲造影劑，其特征在于二硬脂酰磷脂酰膽堿、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000和二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000-生物素的質量比為8.5至9.5：0.1至0.6：0.4至0.6。

3.根據權利要求1或2所述的納米級AMH靶向超聲造影劑，其特征在于二硬脂酰磷脂酰膽堿、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000和二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000-生物素的質量比為9：0.5：0.5。

4.根據權利要求1或2所述的納米級AMH靶向超聲造影劑，其特征在于按下述方法得到：第一步，將二硬脂酰基磷脂酰膽堿、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000和二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000-生物素按比例混合后，得到母液；第二步，將母液進行預熱，再將預熱的母液進行振蕩同時充入氮氣，過程中見白色薄膜形成時，得到脂質膜；第三步，將脂質膜抽真空，然后，將抽真空的的脂質膜加入三羥甲基氨基甲烷緩沖液進行溶解，再經過超聲，使得溶液變得澄清，內部無沉淀時，得到水化液；第四步，將水化液抽真空，然后，灌入全氟丙烷氣體，將灌入全氟丙烷氣體的水化液進行振蕩，得到微泡混懸液，再將微泡混懸液進行離心后，得到下層的生物素化納米微泡；第五步，向每毫升生物素化納米微泡中加入15ul質量濃度為10mg/ml的鏈霉親和素進行攪拌，然后，將加入鏈霉親和素的生物素化納米微泡進行離心，棄去下清液，得到上層微泡，再將上層微泡用磷酸鹽緩沖溶液進行清洗后，得到結合鏈霉親和素的生物素化納米微泡；第六步，向結合鏈霉親和素的生物素化納米微泡中加入AMH抗體進行攪拌，然后，將加入AMH抗體的結合鏈霉親和素的生物素化納米微泡進行離心，棄去下清液，得到上層微泡，再將上層微泡用磷酸鹽緩沖溶液進行清洗，得到納米級AMH靶向造影劑，其中，結合鏈霉親和素的生物素化納米微泡與AMH抗體的體積比為5:1。

5.根據權利要求1或2所述的納米級AMH靶向超聲造影劑，其特征在于氣體內芯為全氟丙烷內芯。

6.根據權利要求3所述的納米級AMH靶向超聲造影劑，其特征在于氣體內芯為全氟丙烷內芯。

7.一種根據權利要求1或2或3或5或6中任意一項所述的納米級AMH靶向超聲造影劑的制備方法，其特征在于按下述方法進行：第一步，將二硬脂酰基磷脂酰膽堿、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000和二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000-生物素按比例混合后，得到母液；第二步，將母液進行預熱，再將預熱的母液進行振蕩同時充入氮氣，過程中見白色薄膜形成時，得到脂質膜；第三步，將脂質膜抽真空，然后，將抽真空的的脂質膜加入三羥甲基氨基甲烷緩沖液進行溶解，再經過超聲，使得溶液變得澄清，內部無沉淀時，得到水化液；第四步，將水化液抽真空，然后，灌入全氟丙烷氣體，將灌入全氟丙烷氣體的水化液進行振蕩，得到微泡混懸液，再將微泡混懸液進行離心后，得到下層的生物素化納米微泡；第五步，向每毫升生物素化納米微泡中加入15ul質量濃度為10mg/ml的鏈霉親和素進行攪拌，然后，將加入鏈霉親和素的生物素化納米微泡進行離心，棄去下清液，得到上層微泡，再將上層微泡用磷酸鹽緩沖溶液進行清洗后，得到結合鏈霉親和素的生物素化納米微泡；第六步，向結合鏈霉親和素的生物素化納米微泡中加入AMH抗體進行攪拌，然后，將加入AMH抗體的結合鏈霉親和素的生物素化納米微泡進行離心，棄去下清液，得到上層微泡，再將上層微泡用磷酸鹽緩沖溶液進行清洗，得到納米級AMH靶向造影劑，其中，結合鏈霉親和素的生物素化納米微泡與AMH抗體的體積比為5:1。