[發明專利]用于檢測諾如病毒GI型和GII型恒溫擴增的引物組、試劑盒及方法

有效

• 申請號: 202110237205.1
• 申請日: 2021-03-03
• 公開（公告）號: CN112760423B
• 公開（公告）日: 2022-06-14
• 發明（設計）人: 曹際娟;鄭秋月;楊莉莉;樸永哲;胡冰
• 申請（專利權）人: 大連民族大學
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11
• 代理公司: 北京嘉科知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11687
• 代理人: 楊波

本發明屬于生物檢測領域，具體涉及用于檢測諾如病毒GI型和GII型恒溫擴增的引物組、試劑盒及方法，引物組包括諾如病毒GI型引物組和諾如病毒GII型引物組，諾如病毒GI型引物組包括外引物GI?OF、外引物GI?OB、內引物GI?IF、內引物GI?IB、環引物GI?LF和環引物GI?LB，諾如病毒GII型引物組包括外引物GII?OF、外引物GII?OB、內引物GII?IF、內引物GII?IB、環引物GII?LF和環引物GII?LB。該引物組可特異、靈敏擴增諾如病毒GI型和GII型，該檢測方法操作簡單、快速、準確、靈敏度高，成本較低，對實驗操作人員和儀器設備要求不高，適合規模性推廣和應用。

技術領域

本發明屬于生物檢測領域，具體涉及用于檢測諾如病毒GI型和GII型恒溫擴增的引物組、試劑盒及方法。

背景技術

諾如病毒(Norwalk Viruses)是一種無包膜單股正鏈RNA病毒，屬杯狀病毒科，是導致非細菌性腸胃炎的主要原因。諾如病毒可分為G I～G V五個基因群，其中引起人類感染的主要是GI和GII群。在已報道的由病原菌引起的食源性疾病中，超過58％的病例是由諾如病毒所致。據統計，在美國，諾如病毒每年造成570至800人死亡，5.6萬至7.1萬人住院，40萬人次急診，170萬至190 萬人次門診。諾如病毒病的主要特征是噴射性嘔吐、非血性腹瀉、惡心、腹部絞痛和低燒等，潛伏期約為12至48小時。在健康人群中，癥狀持續時間一般不超過48h，屬于自限性疾病，但兒童和老年人感染后癥狀更嚴重、患病時間更長，甚至增加了住院的風險。在溫帶地區的國家，大多數感染發生在秋季和冬季，至少70％的疫情報告發生在半封閉的區域，如衛生保健機構、學校、醫院和游輪。諾如病毒可以通過多種途徑感染人類，包括口腔途徑，通過接觸受感染者的排泄物或霧化的嘔吐物，以及通過受污染的表面、食物或水傳播。

由于諾如病毒具有較高傳染性，因此快速、準確的檢測技術對預防和控制其傳播具有重要意義。目前，國內外報道的諾如病毒的核酸檢測方法主要有常規PCR、巢式PCR、實時熒光定量PCR和基因芯片等。常規PCR和巢式PCR 操作繁瑣，擴增產物需要經過電泳檢測才能觀察到擴增結果，檢測時間長，靈敏度較差。實時熒光定量PCR對操作人員有很高的經驗要求，對實驗環境有著嚴格的分區要求，不利于在基層現場推廣使用。基因芯片技術檢測成本昂貴，穩定性較差，目前還無法在基層推廣應用。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術中存在的上述不足，提供用于檢測諾如病毒GI型和GII型恒溫擴增的引物組、試劑盒及方法。該引物組可特異、靈敏擴增諾如病毒GI型和GII型，該檢測方法操作簡單、快速、準確、靈敏度高，成本較低，對實驗操作人員和儀器設備要求不高，適合規模性推廣和應用。

為實現上述發明目的，本發明采用的技術方案如下：

第一方面，本發明提供了一種用于檢測諾如病毒GI型和GII型恒溫擴增的引物組，所述引物組包括諾如病毒GI型引物組和諾如病毒GII型引物組；

其中，所述諾如病毒GI型引物組包括SEQ ID NO.1所示的外引物GI-OF、 SEQ IDNO.2所示的外引物GI-OB、SEQ ID NO.3所示的內引物GI-IF、SEQ ID NO.4所示的內引物GI-IB、SEQ ID NO.5所示的環引物GI-LF和SEQ ID NO.6 所示的環引物GI-LB；

其中，所述諾如病毒GII型引物組包括SEQ ID NO.7所示的外引物GII-OF、 SEQ IDNO.8所示的外引物GII-OB、SEQ ID NO.9所示的內引物GII-IF、SEQ ID NO.10所示的內引物GII-IB、SEQ ID NO.11所示的環引物GII-LF和SEQ ID NO.12所示的環引物GII-LB。

本發明提供的一種用于檢測諾如病毒GI型和GII型恒溫擴增的引物組，可靈敏、特異性的有效用于快速檢測諾如病毒GI型和GII型。