[發明專利]基于血糖儀信號讀出的多種毒品快速檢測方法

在審

• 申請號: 202110236140.9
• 申請日: 2021-03-03
• 公開（公告）號: CN113138271A
• 公開（公告）日: 2021-07-20
• 發明（設計）人: 胡駿杰;上官國強;馬文俊;彭帥
• 申請（專利權）人: 濟寧醫學院
• 主分類號: G01N33/573
• 分類號: G01N33/573;G01N33/543
• 代理公司: 合肥昕華匯聯專利代理事務所(普通合伙) 34176
• 代理人: 崔雅麗

1.基于血糖儀信號讀出的多種毒品快速檢測方法，其特征在于：包括以下步驟：

步驟一：首先制備用于特異性毒品檢測的96孔免疫基板，將甲基苯丙胺、嗎啡、氯胺酮等標準品通過化學合成法與牛血清白蛋白偶聯形成藥品-BSA復合物，作為免疫原分別固定于96孔免疫基板孔底；

步驟二：體液樣品中相應毒品成分將與96孔免疫基板內固定的免疫原共同競爭對應生物素化單克隆抗體上的抗原結合位點，使孔板捕獲到生物素化抗體與樣品中的毒品濃度負相關；

步驟三：經過沖洗后，繼續向體系中加入鏈霉親和素以及生物素化轉化酶，加入底物后，轉化酶可催化其分解為葡萄糖，檢測結果即可以家用血糖儀讀出。

2.根據權利要求1所述的基于血糖儀信號讀出的多種毒品快速檢測方法，其特征在于：所述步驟三中引入脂質體元素，其中脂質體內部容積較大，蔗糖轉化酶分子被封裝在水性空腔內，同時由于脂質體可攜帶大量酶分子并通過加入表面活性劑在可控條件下釋放，在此過程中更多的轉化酶以自由狀態與底物作用生成葡萄糖，使信號有效放大。

3.根據權利要求2所述的基于血糖儀信號讀出的多種毒品快速檢測方法，其特征在于：所述毒品快速檢測的操作步驟如下：

(1)毒品分子-牛血清白蛋白復合物的合成：先將20mg毒品化合物、15mg EDC及30mgBSA混合溶于1.0mL Tris緩沖液中，0-4℃下避光攪拌l h，再加入5.0mg EDC，室溫條件下攪拌反應12h，靜置過夜后，用Tris緩沖液透析除去未反應的小分子物質，得毒品分子與BSA的偶聯物；

(2)96孔免疫基板的包被：將多孔板先經紫外線照射，紫外燈強度為30W，96孔板距離紫外線75cm處照射12h，以增加其吸附性能，同時將(1)所得毒品分子與BSA的偶聯物以碳酸氫鈉緩沖液溶解，其中碳酸氫鈉緩沖液pH為9.6，配制成濃度為100ng mL^-1－20μg mL^-1的溶液，向96孔免疫基板每孔內加入體積為50μL包被液，在4℃冰箱中放置過夜，之后吸去包被液，以緩沖液輕柔沖洗孔板兩次，以N₂吹干，得到復合物包被板；

(3)轉化酶@Biotin-脂質體信標的合成：含有DHPE和1.0mg biotin-DHPE首先溶解于0.1mL氯仿中于1.5mL離心管中，其中biotin-DHPE摩爾比為19:1，自然蒸干形成脂質膜，將脂質膜溶解在含轉化酶的磷酸鹽緩沖液中，其中磷酸鹽緩沖液的pH為7.4，形成脂質體，繼續在45℃水浴中孵育20min，通過0.4μm聚碳酸酯膜以產生均勻尺寸的脂質體懸浮液，用300kDa的透析袋除去過量轉化酶，4℃下攪拌48h；

(4)血糖儀檢測標準曲線的獲?。簩⒖瞻准安煌瑵舛鹊拇郎y目標抗原與一定量抗體免疫，之后加入到96孔免疫基板的檢測孔中，之后洗滌，并逐步加入鏈霉親和素、生物素標記轉化酶，之后加入蔗糖，稍后將反應液滴加到血糖檢測試紙上，并插入血糖儀獲取讀數，以其讀數對抗原濃度作圖并進行回歸分析，得到標準曲線。

4.根據權利要求3所述的基于血糖儀信號讀出的多種毒品快速檢測方法，其特征在于：所述操作步驟(1)毒品化合物中的氯胺酮與BSA以戊二醛交聯法制備。

5.根據權利要求3所述的基于血糖儀信號讀出的多種毒品快速檢測方法，其特征在于：所述操作步驟(4)中用轉化酶@biotin-脂質體、表面活性劑代替鏈霉親和素、生物素標記轉化酶。