[發明專利]基于血糖儀信號讀出的多種毒品快速檢測方法

在審

• 申請號: 202110236140.9
• 申請日: 2021-03-03
• 公開（公告）號: CN113138271A
• 公開（公告）日: 2021-07-20
• 發明（設計）人: 胡駿杰;上官國強;馬文俊;彭帥
• 申請（專利權）人: 濟寧醫學院
• 主分類號: G01N33/573
• 分類號: G01N33/573;G01N33/543
• 代理公司: 合肥昕華匯聯專利代理事務所(普通合伙) 34176
• 代理人: 崔雅麗

本發明公開了基于血糖儀信號讀出的多種毒品快速檢測方法，涉及毒品檢測技術領域，該方法包括將毒品?牛血清白蛋白復合物包覆在96孔免疫基板孔底，制備用于特異性毒品檢測的多孔免疫基板，當樣品與相應抗體加入時，樣品中相應毒品分子將與96孔免疫基板內固定的免疫原共同競爭生物素化抗體上的抗原結合位點，使孔板捕獲到生物素化抗體與樣品中的毒品含量負相關，然后以緩沖液輕柔沖洗兩次，繼續向體系中加入鏈霉親和素以及轉化酶@Biotin?脂質體信標，加入表面活性劑后，轉化酶由脂質體空腔釋放，可催化蔗糖底物分解為葡萄糖，檢測結果以家用血糖儀讀出，該檢測方法以簡單的裝置和輸出方式迅速獲知樣本中毒品或相應濫用藥物成分的定性和定量信息。

技術領域

本發明涉及毒品檢測技術領域，具體是基于血糖儀信號讀出的多種毒品快速檢測方法。

背景技術

甲基苯丙胺(Amphetamine)、嗎啡(morphine)、氯胺酮(ketamine)等物質，統稱毒品，其濫用會帶來人體思想、行為及身體狀態扭曲等隱患，并導致嚴重后果。人體體液樣品(尤其是尿液及唾液)中此類物質及其代謝物的現場快速檢測，是確定藥品濫用行為(特別是在競技體育、刑事司法及危險駕駛等領域)最直接的途徑之一，對于相關物質的管控及社會治安的維護具有重要意義。

迄今為止，用于體液樣品中毒品檢測的方法主要包括氣相色譜/質譜法(GC/MS)、液相色譜/質譜法(LC/MS)以及酶聯免疫吸附法(ELISA)。近幾年來，電化學傳感器和現場采集檢測裝置(POCT)也在該領域得以應用。在所有方法中，由于質譜法(MS)具有高準確度和靈敏度等特點，目前仍然被作為相關物質檢測的“金標準”。然而，質譜技術通常涉及復雜的儀器使用和方法開發，因此其應用常常局限于設備完善的中心實驗室或醫院。ELISA試劑盒和電化學傳感器原理相對簡單且易于使用，但它們仍需依賴特定儀器(如熒光定量PCR儀、電化學工作站)用于信號讀出及數據處理。現場采集檢測裝置，如膠體金檢測試紙，集體液樣品(主要是唾液)現場采集與快速分析于一體，且相關部門(SAMHSA)已明確規定此類裝置可用于體液中相關物質的檢測。但需要特別指出的是，商品化的現場采集檢測裝置，其分析靈敏度和通量均有限，且絕大多數只能提供定性檢測結果，并不能完全滿足現場快速、準確、定量分析的需求。相關物質的快速鑒定檢測方法性能仍有待提高。

目前，家用血糖儀(PGM)是最經典的、可提供定量分析結果的即時采集和診斷儀器，同時，它具有便于攜帶、價格低廉、檢測結果可信等優點。在傳統觀念中，血糖儀僅用于血液中葡萄糖含量的檢測。為充分發揮其優勢，家用血糖儀也可用來檢測非葡萄糖靶標，如生物因子、疾病標志物及重金屬離子等。因此，我們將蔗糖轉化酶催化底物蔗糖生成葡萄糖的反應結合家用血糖儀定量平臺，創造性地引入到毒品檢測的信號輸出過程中，建立普適性方法，用于體液樣品中多種毒品快速檢測。所建平臺信號輸出方式得以簡化，從而使檢測效率大大提高。后續反應借用生物素化脂質體(biotin-liposome)內部空腔裝入更多轉化酶，通過加入表面活性劑使其釋放，催化底物轉化生成更多葡萄糖對信號進行放大，得到更加靈敏和準確的檢測結果。

發明內容

針對現有技術中存在的問題，本發明的目的在于提供基于血糖儀信號讀出的多種毒品快速檢測方法，將蔗糖轉化酶用作免疫反應的信號轉化基團，催化蔗糖分解為葡萄糖，從而將目標物質的檢測轉化為葡萄糖含量的檢測，進而轉化為便攜式家用血糖儀的讀出值；本方法通過運用脂質體包裹蔗糖信號分子，實現信號放大，以實現對目標物的高特異性、高靈敏性、快速鑒定分析。

為實現上述目的，本發明提供如下技術方案：包括以下步驟：

步驟一：首先制備用于特異性毒品檢測的96孔免疫基板，將甲基苯丙胺、嗎啡、氯胺酮等標準品通過化學合成法與牛血清白蛋白(BSA)偶聯形成藥品-BSA復合物，作為免疫原分別固定于96孔免疫基板孔底；

步驟二：體液樣品中相應毒品成分將與96孔免疫基板內固定的免疫原共同競爭對應生物素化單克隆抗體上的抗原結合位點，使孔板捕獲到生物素化抗體與樣品中的毒品濃度負相關；