[發(fā)明專利]一種針對新型冠狀病毒中和抗體快速檢測試劑盒

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• 申請?zhí)枺?/td>: 202110233117.4
• 申請日: 2021-03-03
• 公開（公告）號: CN112834747A
• 公開（公告）日: 2021-05-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊帆;楊明霞;楊致亭;劉亞婧;王彩云;劉仁萍
• 申請（專利權(quán)）人: 山東康華生物醫(yī)療科技股份有限公司
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/68;G01N33/558;G01N33/543;G01N33/532
• 代理公司: 濰坊盛潤知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 37299
• 代理人: 李光林

本發(fā)明提供了一種新型冠狀病毒中和抗體快速檢測試劑盒，包括上蓋、下蓋和位于上蓋和下蓋之間的膠體金結(jié)合物墊，所述上蓋上設(shè)置有加樣孔，所述下蓋上設(shè)置有穿刺部件，所述穿刺部件一端與下蓋固定連接，所述穿刺部件的另一端位于加樣孔內(nèi)，還包括可以放置于加樣孔的孵育容器，所述孵育容器底部具有密封部件，所述孵育容器放置于加樣孔時，所述穿刺部件刺破密封部件使孵育容器內(nèi)的樣本加到膠體金結(jié)合物墊上。檢測時，可以放大信號，提高靈敏度。本發(fā)明將生物素化RBD重組抗原固相在孵育容器中，獨(dú)立于試紙條本身，實(shí)現(xiàn)提前孵育后再加樣，采用此種模式靈敏度提高較大，檢測中和抗體靈敏度由1ug提高至50ng，檢測快速、準(zhǔn)確。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種針對新型冠狀病毒中和抗體快速檢測試劑盒。

背景技術(shù)

針對新冠病毒疫苗研發(fā)正在進(jìn)行，科學(xué)家們希望通過大規(guī)模開發(fā)最新的疫苗來控制已經(jīng)大流行的型冠狀病毒，因此，評估疫苗注射者對新型冠狀病毒感染的免疫能力備受關(guān)注。

新型冠狀病毒（SARS-CoV-2）是通過其表面spike蛋白的受體結(jié)合域（RBD）與宿主細(xì)胞的受體ACE2結(jié)合，中和抗體具有特異性和高親和力特點(diǎn)，能夠搶先與病毒刺突蛋白(RBD蛋白)結(jié)合，從而阻斷病毒與宿主細(xì)胞結(jié)合來有效的控制感染。所以，能否產(chǎn)生中和抗體成為評估對新型冠狀病毒感染的免疫能力的重要依據(jù)。

目前，有幾種基于ELISA的中和抗體檢測試劑盒，然而，進(jìn)行新型冠狀病毒（SARS-CoV-2）中和試驗(yàn)或ELISA需要復(fù)雜的實(shí)驗(yàn)室設(shè)置，盡管敏感性和特異性較高，但耗時較長；市面上膠體金法的中和抗體檢測靈敏度普遍較低，針對于ELISA法抑制率在20%～30%的樣本基本檢測不出。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是針對以上不足，提供一種新型冠狀病毒中和抗體快速檢測試劑盒，其檢測靈敏度高、特異性好、檢測快速、準(zhǔn)確。

為了解決以上技術(shù)問題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：

一種新型冠狀病毒中和抗體快速檢測試劑盒，包括上蓋、下蓋和位于上蓋和下蓋之間的膠體金結(jié)合物墊，所述上蓋上設(shè)置有加樣孔，所述下蓋上設(shè)置有穿刺部件，所述穿刺部件一端與下蓋固定連接，所述穿刺部件的另一端位于加樣孔內(nèi)，還包括可以放置于加樣孔的孵育容器，所述孵育容器底部具有密封部件，所述孵育容器放置于加樣孔時，所述穿刺部件刺破密封部件使孵育容器內(nèi)的樣本加到膠體金結(jié)合物墊上。

作為一種優(yōu)化方案，所述孵育容器的形狀為圓筒狀，所述加樣孔為圓形，所述孵育容器的外徑與加樣孔的直徑相等。

作為一種優(yōu)化方案，所述孵育容器的上部具有可打開或關(guān)閉的密封蓋。

作為一種優(yōu)化方案，所述孵育容器和密封部件為一體結(jié)構(gòu)或分體結(jié)構(gòu)。

作為一種優(yōu)化方案，所述穿刺部件為穿刺針，其尖端位于加樣孔內(nèi)。

作為一種優(yōu)化方案，所述穿刺部件數(shù)量至少一根。

作為一種優(yōu)化方案，所述孵育容器內(nèi)固相有生物素化RBD重組抗原，生物素化RBD重組抗原固相方法如下：

將RBD重組抗原使用10mM PBS溶液調(diào)節(jié)其終濃度為10～20μg /mL，加入1mg/mL 生物素-N羥基丁二酰亞胺酯溶液，室溫靜置1h后用10mM PBS透析過夜，制得生物素化RBD重組抗原；然后將生物素化RBD重組抗原用PBS稀釋5～10倍后分裝至孵育容器中，分裝量為0.1mL，置于溫度18~28℃，濕度＜45%的環(huán)境中，干燥40~50小時。

作為一種優(yōu)化方案，所述膠體金結(jié)合物墊為鏈霉親和素結(jié)合物墊，所述鏈霉親和素結(jié)合物墊的制備方法如下：

將40nm膠體金溶液調(diào)節(jié)pH為9.0，加入鏈霉親和素，其終濃度為20～25μg /mL，室溫靜置1h，加入1/10體積含10% BSA磷酸鹽溶液，室溫靜置30min，在4℃條件下7000 rpm離心30min，獲得沉淀物即為膠體金標(biāo)記的鏈霉親和素，制得膠體金標(biāo)記物。