[發明專利]一種用于區分大蒜品種的RAPD引物及其應用

在審

• 申請號: 202110233069.9
• 申請日: 2021-03-03
• 公開（公告）號: CN113186326A
• 公開（公告）日: 2021-07-30
• 發明（設計）人: 曾愛松;許園園;宋立曉;邢苗苗;嚴繼勇
• 申請（專利權）人: 江蘇省農業科學院
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204
• 代理人: 丁靜靜

本發明公開了一種用于區分大蒜品種的RAPD引物，屬于分子生物學分子標記領域。該方法通過設計篩選出的3個RAPD隨機引物，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1～3所示，用于擴增未知大蒜品種的DNA，通過統計凝膠電泳后的譜帶，區分出具有唯一特異性譜帶的品種，并建立被區分品種的樹形鑒別圖。本發明的引物提高了RAPD反應的穩定性，操作簡便，高效準確，節省引物，僅通過3次PCR就可輕松的將‘中蒜3號’等16個大蒜品種在分子水平上進行快速區分，所得到的品種鑒定圖比聚類樹更具有直觀性，即根據品種鑒定圖就可以快速找出能區分任意兩個品種的引物，該方法可以實現大蒜種苗早期鑒定，在其他物種上也具有廣泛的通用性。

技術領域

本發明屬于分子生物學技術領域，具體涉及一種利用RAPD分子標記技術快速區分大蒜品種的方法。

背景技術

大蒜為百合科蔥屬植物球形鱗莖，起源于中亞地區，具有食用、保健、藥用的功效，長期以來深受人們的喜愛，我國擁有世界上最大的大蒜種植面積，約占世界總種植面積 的30％多。品種資源豐富，南北方均有栽培，產量占世界總量的1/4多，因此，大蒜是 我國重要的出口創匯蔬菜之一，由于我國大蒜種質資源眾多，再加上不同大蒜栽培地區 生態環境迥異，因此不同地區的栽培品種一般具有顯著的區域適應性，形成了形態各異 的生態型，產生了眾多地方品種，并形成了許多知名大蒜產區。因此，建立大蒜品種快 速可靠的鑒定技術體系對于大蒜品種遺傳資源的研究保護、苗期鑒定、品種區分乃至大 蒜產業的持續發展等具有重要的意義。

DNA分子標記是隨著分子克隆和重組DNA等生物技術迅速發展而產生的一類遺傳標記，由于其直接建立在分子水平上，而不受外界環境、作物發育階段、取樣部位等因 素影響，其檢出的多態性位點是無限的，故鑒定結果具有高度的可靠性，且重復性高， 鑒別力強。

由于目前傳統單一的形態學品種鑒定方法已無法滿足有效鑒別或區分當今日益增 多的品種的要求。分子標記的應用給作物遺傳育種研究帶來了巨大變化，同時也應用到了品種鑒定的研究中。在常用的RAPD、ISSR、SRAP和AFLP等眾多分子標記技術中， 隨機擴增多態性DNA(Random Amplified Polymorphic DNA，RAPD)基于PCR技術，是 應用較早的分子標記技術之一，它以分析程序簡便快捷，周期性短，不易受外界環境影 響，所需費用低，且無需對基因組序列進行預知等優點，已被普遍應用于指紋圖譜構建、 種質資源的遺傳基礎研究、基因的快速定位、基因連鎖標記、遺傳多樣性分析，品種分 類研究等方面。

現有的利用RAPD技術在進行蔬菜作物品種區分與種質鑒定的研究工作中，多采用計算機軟件繪制數字化指紋圖譜并結合統計學軟件聚類分析得出聚類樹，但是此聚類分析結果不但無法直觀顯示出區分品種的引物，無法顯示鑒別過程，其操作量大，缺乏實 用性。

發明內容

發明目的：本發明需要解決的技術問題是提供一種利用RAPD技術區分大蒜品種的引物。

本發明還要解決的技術問題是提供上述引物在區分大蒜品種的應用。

技術方案：為解決上述技術問題，本發明采用如下技術方案：

一種用于區分大蒜品種的RAPD引物，包括如下引物：

RP162：5’-TCTGTAGTCAGCCA-3’；

RP0581：5’-AGTCAGCTGGA-3’；

RP203：5’-AGCTGCTGAGTC-3’。

上述用于區分大蒜品種的RAPD引物在區分大蒜品種中的應用在本發明的保護范圍之內。

其中，所述的大蒜品種包括：‘中蒜3號’、‘中蒜1號’、‘磨子蒜’、‘三季早’、‘日本大蒜’、‘硬軟葉’、‘二季早’、‘正月早’、‘溫二月’、‘灰葉子’、‘四六瓣’、‘蒼山大蒜’、‘云 南紫皮大蒜’、‘二水早’、‘嘉定2號’、‘普陀大蒜’。