[發明專利]一種用于區分大蒜品種的RAPD引物及其應用

在審

• 申請號: 202110233069.9
• 申請日: 2021-03-03
• 公開（公告）號: CN113186326A
• 公開（公告）日: 2021-07-30
• 發明（設計）人: 曾愛松;許園園;宋立曉;邢苗苗;嚴繼勇
• 申請（專利權）人: 江蘇省農業科學院
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204
• 代理人: 丁靜靜

1.一種用于區分大蒜品種的RAPD引物，其特征在于，包括如下引物：

RP162：5’-tctgtagtcagcca-3’；

rp0581：5’-agtcagctgga-3’；

rp203：5’-agctgctgagtc-3’。

2.權利要求1所述用于區分大蒜品種的RAPD引物在區分大蒜品種中的應用。

3.根據權利要求2所述的應用，其特證在于，所述的大蒜品種包括：‘中蒜3號’、‘中蒜1號’、‘磨子蒜’、‘三季早’、‘日本大蒜’、‘硬軟葉’、‘二季早’、‘正月早’、‘溫二月’、‘灰葉子’、‘四六瓣’、‘蒼山大蒜’、‘云南紫皮大蒜’、‘二水早’、‘嘉定2號’、‘普陀大蒜’。

4.根據權利要求2所述的應用，其特證在于，包括如下步驟：

(1)提取大蒜葉片基因組DNA；

(2)利用RP162引物對步驟(1)得到的基因組DNA進行RAPD擴增，得到的PCR產物用瓊脂糖凝膠電泳檢測，若在800bp、100bp處都出現特征性譜帶，而在1200bp無特征性譜帶，大蒜的品種為‘三季早’；若在800bp、100bp、1200bp處都出現特征性譜帶，大蒜品種為‘正月早’；若在800bp處出現特征性譜帶，而在1200bp、100bp處都未出現特征譜帶，則大蒜品種為‘日本大蒜’；

(3)若瓊脂糖凝膠電泳檢測結果與步驟(2)不符，則利用RP0581引物再對基因組DNA進行RAPD擴增，

若利用RP162引物擴增時，在1200bp處出現特征性譜帶，而在800bp和100bp處都未出現特征性譜帶，RP0581引物擴增后使用如下方法判斷大蒜品種：若利用RP0581引物擴增時，在1500bp、500bp、200bp處都出現特征性譜帶，其品種為‘二季早’；在200bp處出現特征性譜帶，而在1500bp、500bp處都未出現特征性譜帶，其品種為‘二水早’；若在1500bp、200bp都出現特征譜帶而在500bp未出現特征性譜帶的，其品種為‘普陀大蒜’；若在1500bp未出現特征性譜帶，而在500bp、200bp處出現特征譜帶，其品種為‘中蒜3號’；若在1500bp出現特征性譜帶，而在500bp、200bp都未出現特征譜帶，則進入步驟(4)；

若利用RP487引物擴增時，在800bp和1200bp處出現特征性譜帶，而在100bp處未出現特征性譜帶，利用引物RP0581擴增后使用如下方法判斷大蒜品種：經瓊脂糖凝膠電泳檢測在2000bp、500bp處均出現特征性譜帶，1000bp處未出現特征性譜帶，其品種為‘硬軟葉’；若在2000bp、1000bp都出現特征性譜帶，而500bp處未出現特征性譜帶，其品種為‘灰葉子’；若在1000bp、500bp出現特征性譜帶，而2000bp處未出現特征性譜帶，其品種為‘云南紫皮大蒜’；若在1000bp出現特征性譜帶，而2000bp、500bp都未出現特征性譜帶，則進入步驟(5)；

(4)利用RP0581引物進行RAPD擴增，若在1500bp出現特征性譜帶，而在500bp、200bp都未出現特征譜帶，RP203引物擴增后使用如下方法判斷大蒜品種：

若在2000bp、500bp處都出現特征性譜帶，其品種為‘磨子蒜’；若在2000bp處出現特征性譜帶，500bp處未出現特征性譜帶，其品種為‘四六瓣’；若在2000bp和500bp均未出現特征性譜帶的，其品種為‘嘉定2號’；

(5)利用RP0581引物進行RAPD擴增，若在1000bp出現特征性譜帶，而2000bp、500bp都未出現特征性譜帶，再用RP203引物進行RAPD擴增后使用如下方法判斷大蒜品種：

若在600bp、200bp處都出現特征性譜帶的，其品種為‘溫二月’；在600bp處出現特征性譜帶，而在200bp未出現特征性譜帶的，其品種為‘蒼山大蒜’；若200bp處出現特征性譜帶，其品種為‘中蒜1號’。