[發明專利]甬甜5號甜瓜種子純度的快速鑒定方法

有效

• 申請號: 202110232252.7
• 申請日: 2021-03-02
• 公開（公告）號: CN112961931B
• 公開（公告）日: 2023-01-10
• 發明（設計）人: 宋慧;丁偉紅;臧全宇;王毓洪;張香琴
• 申請（專利權）人: 寧波市農業科學研究院
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 寧波成舟專利代理事務所(普通合伙) 33306
• 代理人: 高經

本發明屬于種子純度鑒定的技術領域，提供甬甜5號甜瓜種子純度的快速鑒定方法，該鑒定方法包括用SSR1、SSR2和SSR3三對特異性引物對甬甜5號甜瓜單株的幼苗DNA進行PCR擴增；所述SSR1、SSR2和SSR3特異性引物的序列信息分別如下：SSR1：SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2；SSR2：SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4；SSR3：SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6。本發明方法的鑒定結果準確可靠、不受環境影響，可以更好地保障甬甜5號甜瓜種子的純度。

技術領域

本發明屬于種子純度鑒定的技術領域，具體涉及甬甜5號甜瓜種子純度的快速鑒定方法。

背景技術

種子純度是評價作物種子質量的重要指標，導致種子純度不達標的原因主要有親本純度低、機械混雜和授粉隔離不到位等(李逸龍.種子純度研究現狀與發展.長江蔬菜.2011.18：6-10)。純度不達標的種子一經出售使用，會給農戶造成重大的經濟損失，給種子生產和銷售部門帶來糾紛。因此，種子純度檢驗是種子生產工作中必不可少的重要步驟，其也是種子生產部門需要高度重視的問題。

通常種子純度的鑒定方法是通過觀察作物的種子、植株和果實等表型性狀來判斷(李淑娟.種子純度鑒定方法概述.青海大學學報.2003.21(1)：16-19)。這些依靠表型鑒定純度的方法，通常費時費力、易受環境影響，可靠性差。而且對于差異不明顯的表型特征，鑒定結果受人為因素干擾嚴重。現有種子純度鑒定方法的效率和鑒定結果還有待提高。

甜瓜經濟效益高，爬地栽培每畝收益5000-6000元，如果種子純度降低會造成甜瓜異質性增強，果實品質下降、產量降低，會造成生產、貯藏和銷售過程中的慘重經濟損失?！梆?號”是寧波市農業科學研究院培育的優質、脆肉的新甜瓜品種，并且獲得了植物新品種權(CNA20121325.8)，其白皮橙肉、口感細膩，具有品質優、易栽培、適應性廣的優點?，F已輻射推廣至浙江、江蘇、山東、廣東、新疆等地，應用前景廣闊，連續列為浙江省主導瓜菜品種。隨著“甬甜5號”種植面積不斷擴大，種子銷售供應不求。常規表型的種子鑒定方法，效率低和準確性差，難以滿足快速大量制種和銷售過程中的種子純度檢測要求。

SSR(Simple Sequence Repeat)分子標記技術操作簡單，重復性好，符合作物種子純度鑒定準則，已經在甜瓜上使用，例如，柳劍麗等.利用SSR標記鑒定甜瓜雜交種的種子純度.分子植物育種.2006.32(7)：19-22；方小雪等.利用SSR分子標記鑒定甜瓜雜交種純度.浙江農業科學.2016.57(2)：178-181，專利ZL2014107372664公開甜瓜品種哈翠種子純度的快速檢測方法，但是甜瓜類型豐富，遺傳背景復雜，不同遺傳背景的親本配制的雜交種，需要對親本材料進行SSR分子標記篩選，才可以獲得用該親本配制的雜交種的純度鑒定。

有鑒于此，特提出本發明申請。

發明內容

本發明提供甬甜5號甜瓜種子純度的快速鑒定方法，所述鑒定方法包括用SSR1、SSR2和SSR3三對特異性引物對甬甜5號甜瓜單株的幼苗DNA進行PCR擴增；

所述SSR1、SSR2和SSR3特異性引物的序列信息分別如下：

SSR1：SEQ IDNO.1和SEQ ID NO.2；

SSR2：SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4；

SSR3：SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6。

作為一種實施方式，所述鑒定方法還包括用所述SSR1、SSR2或SSR3特異性引物對鑒定的不純合親本進行擴增、提高親本純度的步驟。

作為一種實施方式，當雜株表現為母本P1的多態性位點，父本P2對應位點不純合時，用SSR1、SSR2或SSR3引物對不純合父本P2進行擴增，剔除與P2多態性位點不同的單株。