[發明專利]一種用于DNA編碼化合物庫建庫接頭的生產工藝

在審

• 申請號: 202110231891.1
• 申請日: 2021-03-02
• 公開（公告）號: CN113004363A
• 公開（公告）日: 2021-06-22
• 發明（設計）人: 劉宗文;雍金貴;錢鑫
• 申請（專利權）人: 通用生物系統（安徽）有限公司
• 主分類號: C07H21/04
• 分類號: C07H21/04;C07H1/00
• 代理公司: 合肥正則元起專利代理事務所(普通合伙) 34160
• 代理人: 劉生昕

本發明公開了一種用于DNA編碼化合物庫建庫接頭的生產工藝，制備合成柱，合成柱的內部填充有載體和CPG，將準備好的合成柱填塞入合成板中，并在合成板上標記合成批次號。該用于DNA編碼化合物庫建庫接頭的生產工藝，通過DNA編碼化合物庫構建的核心引物原料中用于連接小分子與DNA編碼化合物庫的AOP?Headpiece?primer，利用亞磷酰胺三酯法合成Headpiece?primer，具有高效、快速的偶聯以及起始反應物穩定的優勢，相比傳統生產方法生產出的AOP?Headpiece?primer得率高、成本低且周期短，獲得穩定的批次產品，同時相比小規格多批次合成成本低，周期短。

技術領域

本發明涉及生物醫藥技術領域，具體為一種用于DNA編碼化合物庫建庫接頭的生產工藝。

背景技術

藥物篩選包括高通量藥物篩選和DNA編碼分子庫藥物篩選，DNA編碼分子庫藥物篩選是將靶點蛋白和數億級的化合物庫進行篩選，分子庫所篩選的靶點也種類繁多，涵蓋了基本上所有的疾病類型，而不是傳統的單個化合物依次篩選，所以這種方式的篩選具有明顯的速度和成本優勢。DNA編碼分子庫藥物篩選技術在近年內逐漸發展并成熟起來，已經成為當前創新藥發現領域最前沿的技術之一，有科學家已經對一些重要的惡性腫瘤的藥物靶點成功篩選出了一系列高活性的藥物候選化合物，此技術的起點和支撐是DNA編碼化合物庫，而AOP-Headpiece-primer是DNA編碼化合物庫建庫的核心原料。

通過固相亞磷酰胺三酯法可以直接為下游DNA編碼化合物庫建庫提供AOP-Headpiece-primer，為下游建庫省去用酶連接來得到AOP-Headpiece-primer的操作、時間和成本，且可以使用到批次更穩定的原料，本發明提出了一種用于DNA編碼化合物庫建庫接頭的生產工藝。

發明內容

(一)解決的技術問題

針對現有技術的不足，本發明提供了一種用于DNA編碼化合物庫建庫接頭的生產工藝，解決了傳統制備用于DNA編碼化合物庫建庫接頭的Headpiece-primer存在成本高，周期長的問題。

(二)技術方案

為實現以上目的，本發明通過以下技術方案予以實現：一種用于DNA編碼化合物庫建庫接頭的生產工藝，具體包括以下步驟：

步驟一、制備合成柱，合成柱的內部填充有載體和CPG，將準備好的合成柱填塞入合成板中，并在合成板上標記合成批次號；

步驟二、檢查合成試劑量和所在位置以及合成儀的狀態，打開合成程序，導入Headpiece-primer序列，啟動合成程序開始合成，合成時采用固相亞磷酰胺三酯法，從Headpiece-primer的3’端向5’端依次合成，每個循環將一個亞磷酰胺單體與上一循環連接在固相載體上的產物通過3'到5'磷酸二酯鍵相連，合成過程中，正常DMT被洗脫的顏色呈橘紅色；

步驟三、將合成的帶有Headpiece-primer的合成柱浸泡在氨水中，加熱氨水至70-90攝氏度，浸泡30-50分鐘，連接在CPG上的Headpiece-primer被切割下來，得到產物a；

步驟四、對產物a進行純化處理，得到Headpiece-primer；

步驟五、取Headpiece-primer溶解在硼酸鹽緩沖溶液中，攪拌混合均勻，得到基礎液b；

步驟六、首先向基礎液b中加入AOP，再加入DMT-MM，室溫條件下靜置10-12小時，得到AOP-Headpiece-primer粗品；

步驟七、向AOP-Headpiece-primer粗品中加入NaCl溶液和冰乙醇溶液，將混合液放置在零下20攝氏度1小時，離心處理收集沉淀物，對沉淀物進行凍干處理，得到凍干粉，將凍干粉投入哌啶水溶液中進行脫保護，對脫保護產物用乙醇離心洗滌除去溶劑和哌啶，最后通過高效液相色譜法去除雜質，得到AOP-Headpiece-primer目的產品。