[發明專利]一種誘導單核細胞向樹突狀細胞分化的方法

在審

• 申請號: 202110231527.5
• 申請日: 2021-03-02
• 公開（公告）號: CN113186159A
• 公開（公告）日: 2021-07-30
• 發明（設計）人: 呂麗萍;俞敏嬌;鮑巧燕;顧金海;王雨婷
• 申請（專利權）人: 妙順（上海）生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/0784
• 分類號: C12N5/0784
• 代理公司: 上海微策知識產權代理事務所(普通合伙) 31333
• 代理人: 湯俊明

本發明涉及細胞培養技術領域，更具體地，本發明涉及一種誘導單核細胞向樹突狀細胞分化的方法。包括：將CD14+單核細胞加入完全培養基一中培養4?5天后，加入完全培養基二培養1?2天，得到所述樹突狀細胞。通過控制CD14+單核細胞的分選方法，有效去除黏附細胞和PBMC中非CD14+單核細胞的數目，在增加可分化成樹枝狀細胞的細胞含量的同時，還有利于在較短時間和較低細胞因子含量的情況下，得到更高的樹枝狀細胞。GM?CSF或白細胞介素可作為細胞因子促進樹枝狀細胞的分化，單純添加GM?CSF或白細胞介素，如白細胞介素?4時，DC細胞誘導率較低，而當兩者共同作用時，可在較低細胞因子終濃度下，具有高的誘導率，縮短分化時間。

技術領域

本發明涉及細胞培養技術領域，更具體地，本發明涉及一種誘導單核細胞向樹突狀細胞分化的方法。

背景技術

樹突狀細胞(dendritic cell，DC)因其表面具有星狀多形性或樹枝狀突起而得名，樹突狀細胞(Dendritic cells,DC)是機體功能最強的專職抗原遞呈細胞(Antigenpresenting cells,APC)，它能高效地攝取、加工處理和遞呈抗原，未成熟DC具有較強的遷移能力，成熟DC能有效激活初始T細胞，處于啟動、調控、并維持免疫應答的中心環節。

DC起源自骨髓多能造血干細胞，分化主要有兩條途徑:①髓樣干細胞在GM-CSF的刺激下分化為DC，稱為髓樣DC(myeloid dendritic cells，MDC)，也稱DC1，與單核細胞和粒細胞有共同的前體細胞；②來源于淋巴樣干細胞，與T細胞和NK細胞有共同的前體細胞，稱為淋巴樣DC(Lymphoid dendritic cells，LDC)或漿細胞樣DC(plasmacytoid dendriticcells，pDC)，即DC2。

目前DC細胞主要使用外周血和臍帶血中提取的單核細胞添加細胞因子分化獲得，而經過分化得到的DC誘導率一般較低，需要添加較多的細胞因子、操作繁瑣，且用于分化的單核細胞往往含有不能分化或分化成其他細胞的成分，也會對樹枝狀細胞的分化造成影響。

發明內容

為了解決上述問題，本發明第一個方面提供了一種誘導單核細胞向樹突狀細胞分化的方法，包括：

將CD14+單核細胞加入完全培養基一中培養4-5天后，加入完全培養基二培養1-2天，得到所述樹突狀細胞。

作為本發明一種優選的技術方案，所述CD14+單核細胞的細胞密度為7×10⁶～25×10⁶個/mL。

作為本發明一種優選的技術方案，所述完全培養基一包括胎牛血清、細胞因子，所述胎牛血清占完全培養基一的體積百分數為8～12％。

作為本發明一種優選的技術方案，所述細胞因子包括GM-CSF、白細胞介素、干擾素α中的至少一種。

作為本發明一種優選的技術方案，所述GM-CSF在完全培養基一中的終濃度為20～90ng/mL。

作為本發明一種優選的技術方案，所述白細胞介素在完全培養基一中的終濃度為10～40ng/mL。

作為本發明一種優選的技術方案，所述完全培養基二包括胎牛血清、細胞因子和成熟因子，所述成熟因子選自脂多糖、腫瘤壞死因子α、干擾素γ中的一種。

作為本發明一種優選的技術方案，所述成熟因子在完全培養基二上的終濃度為1～5μg/mL。

作為本發明一種優選的技術方案，所述CD14+單核細胞的分選方法包括：將PBMC細胞加入緩沖液中混合，加入CD14磁珠培養后，離心，得到的細胞沉淀過磁珠分選柱子，得到細胞懸液，離心，得到所述CD14+單核細胞。

本發明第二個方面提供了一種所述的方法的應用，用于樹突狀細胞培養。

本發明與現有技術相比具有以下有益效果：