[發(fā)明專利]一種誘導(dǎo)單核細胞向樹突狀細胞分化的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110231527.5
• 申請日: 2021-03-02
• 公開（公告）號: CN113186159A
• 公開（公告）日: 2021-07-30
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 呂麗萍;俞敏嬌;鮑巧燕;顧金海;王雨婷
• 申請（專利權(quán)）人: 妙順（上海）生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/0784
• 分類號: C12N5/0784
• 代理公司: 上海微策知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 31333
• 代理人: 湯俊明

1.一種誘導(dǎo)單核細胞向樹突狀細胞分化的方法，其特征在于，包括：

將CD14+單核細胞加入完全培養(yǎng)基一中培養(yǎng)4-5天后，加入完全培養(yǎng)基二培養(yǎng)1-2天，得到所述樹突狀細胞。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的誘導(dǎo)單核細胞向樹突狀細胞分化的方法，其特征在于，所述CD14+單核細胞的細胞密度為7×10⁶～25×10⁶個/mL。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的誘導(dǎo)單核細胞向樹突狀細胞分化的方法，其特征在于，所述完全培養(yǎng)基一包括胎牛血清、細胞因子，所述胎牛血清占完全培養(yǎng)基一的體積百分數(shù)為8～12％。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的誘導(dǎo)單核細胞向樹突狀細胞分化的方法，其特征在于，所述細胞因子包括GM-CSF、白細胞介素、干擾素α中的至少一種。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的誘導(dǎo)單核細胞向樹突狀細胞分化的方法，其特征在于，所述GM-CSF在完全培養(yǎng)基一中的終濃度為20～90ng/mL。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的誘導(dǎo)單核細胞向樹突狀細胞分化的方法，其特征在于，所述白細胞介素在完全培養(yǎng)基一中的終濃度為10～40ng/mL。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的誘導(dǎo)單核細胞向樹突狀細胞分化的方法，其特征在于，所述完全培養(yǎng)基二包括胎牛血清、細胞因子和成熟因子，所述成熟因子選自脂多糖、腫瘤壞死因子α、干擾素γ中的一種。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的誘導(dǎo)單核細胞向樹突狀細胞分化的方法，其特征在于，所述成熟因子在完全培養(yǎng)基二上的終濃度為1～5μg/mL。

9.根據(jù)權(quán)利要求1～8任意一項所述的誘導(dǎo)單核細胞向樹突狀細胞分化的方法，其特征在于，所述CD14+單核細胞的分選方法包括：將PBMC細胞加入緩沖液中混合，加入CD14磁珠培養(yǎng)后，離心，得到的細胞沉淀過磁珠分選柱子，得到細胞懸液，離心，得到所述CD14+單核細胞。

10.一種根據(jù)權(quán)利要求1～9任意一項所述的誘導(dǎo)單核細胞向樹突狀細胞分化的方法的應(yīng)用，其特征在于，用于樹突狀細胞培養(yǎng)。