[發(fā)明專利]一種鼓槌石斛SSR分子標記引物組合物及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110231059.1
• 申請日: 2021-03-02
• 公開（公告）號: CN112725521B
• 公開（公告）日: 2021-09-03
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李杰;王再花;葉廣英;劉海林
• 申請（專利權(quán)）人: 廣東省農(nóng)業(yè)科學院環(huán)境園藝研究所
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 北京精金石知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11470
• 代理人: 尉月麗

本發(fā)明提供了一種鼓槌石斛SSR分子標記引物組合物及其應(yīng)用，屬于分子生物學技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明從鼓槌石斛轉(zhuǎn)錄組序列中，開發(fā)并篩選出擴增效果好、多態(tài)性高的25對SSR分子標記引物，采用所述的SSR分子標記引物，可對鼓槌石斛群體的遺傳多樣性及親緣關(guān)系進行分析，也可對鼓槌石斛無性系或品種進行種質(zhì)鑒定和親緣關(guān)系分析，具有高效、準確、實用、不受季節(jié)影響等優(yōu)點，為后續(xù)鼓槌石斛種質(zhì)資源管理、育種、遺傳保護、群體間和群體內(nèi)的遺傳多樣性分析等奠定了基礎(chǔ)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及分子生物學技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種鼓槌石斛SSR分子標記引物組合物及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

鼓槌石斛(Dendrobiumchrysotoxum)為蘭科石斛屬多年附生草本植物，是集觀賞、食、藥為一體且栽培較廣的石斛種類之一，被收錄于2020年版《中國藥典》。其莖、花晾干后泡水喝，具有美容明目、安神補血、抗氧化和增強免疫力等功效。同時，鼓槌石斛莖肉質(zhì)紡錘形，葉四季常綠，花金黃色，花量大，稍帶香氣，花期長達1個月，具有較高的觀賞價值，可作大小盆栽、垂直懸掛、附生石塊上或樹枝上等多樣栽培和應(yīng)用。鼓槌石斛原產(chǎn)于我國西南地區(qū)，生于海拔500-1600m，陽光充足的常綠闊葉林中樹干上或疏林下巖石上，國外分布于印度東北部、緬甸、泰國、老撾和越南。

SSR分子標記具有使用簡便、快速、穩(wěn)定性高、等位基因多樣性高以及可做共顯性的等位基因分析等特點，目前已成為一種主要的分子標記技術(shù)，被廣泛應(yīng)用于植物遺傳多樣性分析、群體結(jié)構(gòu)分析、品種鑒定和種質(zhì)資源親緣關(guān)系分析等多方面研究領(lǐng)域。如沈穎等采用ISSR-PCR的方法對石斛屬9種植物進行鑒別，包括美花石斛、束花石斛、疊鞘石斛、鼓槌石斛、細葉石斛、羅河石斛、球花石斛、玫瑰石斛和鐵皮石斛(沈穎,徐程,萬小鳳,等.ISSR-PCR在石斛種間鑒別中的應(yīng)用[J].中草藥,2005,36(3):423-427.)。專利CN104313162A則公開了一種用于鑒別鼓槌石斛和球花石斛的分子特異性標記引物及其方法。

近年來，在鐵皮石斛、金釵石斛等石斛屬植物上開發(fā)了大量的SSR引物，但同屬的鼓槌石斛則尚未有開發(fā)的SSR引物的報道，其遺傳變異分析仍采用RAPD等分析標記，例如Tikendra等(2019)利用12對RAPD引物和11對ISSR引物評估了組培過程中鼓槌石斛克隆苗的遺傳穩(wěn)定性，發(fā)現(xiàn)克隆苗與母株間較高的遺傳單態(tài)性(96.3％)和較低的多態(tài)性(3.6％)。鼓槌石斛作為一種觀賞兼藥用的植物，目前生產(chǎn)上尚未見通過審定且廣泛栽培的鼓槌石斛品種，生產(chǎn)上主要利用其野生資源或組培無菌播種獲得的實生苗或克隆苗，而對這些鼓槌石斛種質(zhì)資源進行鑒定、保育及開發(fā)利用也越來越受到各界的重視。

因此，尋找并開發(fā)適用于鼓槌石斛遺傳研究的SSR引物是進一步開展鼓槌石斛種質(zhì)資源管理、遺傳、保護等研究的前提基礎(chǔ)。

發(fā)明內(nèi)容

針對上述不足，本發(fā)明提供了一種鼓槌石斛SSR分子標記引物組合物及其應(yīng)用。本發(fā)明篩選出在鼓槌石斛中擴增效果好，多態(tài)性高的25對SSR分子標記引物，采用所述的SSR分子標記引物，可對鼓槌石斛群體的遺傳多樣性及親緣關(guān)系進行分析，也可對鼓槌石斛無性系或品種進行種質(zhì)鑒定和親緣關(guān)系分析，具有高效、準確、實用、不受季節(jié)影響等優(yōu)點，為后續(xù)鼓槌石斛種質(zhì)資源管理、育種、遺傳保護、群體間和群體內(nèi)的遺傳多樣性分析等奠定了基礎(chǔ)。

為了實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明的技術(shù)方案如下：

一方面，本發(fā)明提供了一種鼓槌石斛SSR分子標記引物組合物。

具體地，所述的引物組合物如下表1所示：

表1.引物組合物

另一方面，本發(fā)明提供了一種鼓槌石斛種質(zhì)鑒定、遺傳多樣性或親緣關(guān)系分析的產(chǎn)品，所述的產(chǎn)品包含上述SSR分子標記引物組合物。

具體地，所述的產(chǎn)品為獨立試劑或試劑盒。