[發明專利]一種快速、同時檢測食品中大腸桿菌O157:H7和鼠傷寒沙門氏菌的方法

有效

• 申請號: 202110230131.9
• 申請日: 2021-03-02
• 公開（公告）號: CN113373247B
• 公開（公告）日: 2022-04-26
• 發明（設計）人: 李會;孔嘉琪;趙靚;廖小軍;陳愛亮
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院農業質量標準與檢測技術研究所;中國農業大學
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/6851;C12Q1/10;C12Q1/06;C12N15/11
• 代理公司: 北京中建聯合知識產權代理事務所(普通合伙) 11004
• 代理人: 王靈靈;晁璐松

1.一種快速、同時檢測食品中大腸桿菌O157:H7和鼠傷寒沙門氏菌的方法，其特征在于，以待檢測食品樣本為模板直接進行擴增，利用ddPCR同時檢測食品中的大腸桿菌O157:H7和鼠傷寒沙門氏菌；

待檢測食品樣本中菌液濃度換算公式為cfu/mL=copies/μL×20μL/加樣量×1000μL；

所述ddPCR中的擴增體系為：

試劑 體積 濃度

2×ddPCR Supermix for Probes 10.4μL

上游引物 1μL 10μM

下游引物 1μL 10μM

引物探針 0.5μL 10μM

樣品模板 2μL

PCR級去離子水 補足體系至20μL；

對目標菌為大腸桿菌O157:H7的引物對為：

上游引物：5’ -GCACTAAAAGCTTGGAGCAGTTC-3’；

下游引物：5’ -AACAATGGGTCAGCGGTAAGGCTA-3’；

FAM通道探針：5’ -FAM-CGTTGGCGAGGACC-BHQ1-3’；

VIC通道探針：5’ -VIC-CGTTGGCGAGGACC-BHQ1-3’；

對目標菌為鼠傷寒沙門氏菌的引物對為：

上游引物：5’ -GCTTTCTCTACTTAACAGTGCTC-3’；

下游引物：5’ -CAGTGCGATCAGGAAATCAAC-3’；

FAM通道探針：

5’ -FAM-CCTGAATTACTGATTCTGGTACTAATGGTGATG-BHQ1-3’；

VIC通道探針：

5’ -VIC-CCTGAATTACTGATTCTGGTACTAATGGTGATG-BHQ1-3’；

所述食品包括蘋果汁、牛奶和雞肉。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述ddPCR的反應程序為：

（1）微滴生成：通過微滴發生器進行滴化處理，生成微滴；

（2）PCR擴增程序為：預變性10 min,95℃；95℃20s變性，60℃25s退火,72℃60s延伸，40個循環；98℃10 min熱失活；4℃保存。