[發明專利]一種基于鎖核酸修飾的RMA法檢測CYP2C9和VKORC1基因多態性的試劑盒

在審

• 申請號: 202110228740.0
• 申請日: 2021-03-02
• 公開（公告）號: CN112899361A
• 公開（公告）日: 2021-06-04
• 發明（設計）人: 陳大為;陳龍;張瑤
• 申請（專利權）人: 濟南國益生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/6844;C12N15/11
• 代理公司: 濟南信在專利代理事務所(特殊普通合伙) 37271
• 代理人: 殷盛江

1.一種基于鎖核酸修飾的RMA法檢測CYP2C9和VKORC1基因多態性的引物探針組，其特征在于，所述引物探針組分為兩組，A組為檢測CYP2C9*2和*3的引物對、野生型探針和突變型探針；B組為檢測VKORC1-1639GA的引物對、野生型探針和突變型探針，其中，A組的CYP2C9*2引物和探針序列為：

上游引物：5’-GATATGAAGCAGTGAAGGAAGCCCTGATTGAT-3’；

下游引物：5’-AGTAGTCCAGTAAGGTCAGTGATATGGAGTAGG-3’；

野生型探針：

5’-TTGGGATGGGGAAGAGGAGCAT(FAM-dT)GAGGACCG(THF)G(BHQ-dT)TCAAGAGGAAGC(C3spacer)-3’；

突變型探針：

5’-TTGGGATGGGGAAGAGGAGCAT(ROX-dT)GAGGACTG(THF)G(BHQ-dT)TCAAGAGGAAGC(C3spacer)-3’；

A組的CYP2C9*3引物和探針序列為：

上游引物：5’-CAGGAAGAGATTGAACGTGTGATTGGCAGAA-3’；

下游引物：5’-GCAGTGTAGGAGAAACAAACTTACCTTGGGAAT-3’；

野生型探針：

5’-AGATGCTGTGGTGCACGAGGTCCAGAGA(TET-dT)ACA(THF)(BHQ-dT)GACCTTCTCCCCACCA(C3spacer)-3’；

突變型探針：

5’-AGATGCTGTGGTGCACGAGGTCCAGAGA(CY5-dT)ACC(THF)(BHQ-dT)GACCTTCTCCCCACCA(C3spacer)-3’。

B組的VKORC1-1639GA引物和探針序列為：

上游引物：5’-GCAGGAGAGGGAAATATCACAGACGCCAGAG-3’；

下游引物：5’-GTTCTCGTGCCTCAGCCTCCCAAGTAGTTT-3’；

野生型探針：

5’-AGAGAAGACCTGAAAAACAACCAT(FAM-dT)GGCCGGG(THF)GCGG(BHQ-dT)GGCTCACGCCT(C3spacer)-3’；

突變型探針：

5’-AGAGAAGACCTGAAAAACAACCAT(ROX-dT)GGCCAGG(THF)GCGG(BHQ-dT)GGCTCACGCCT(C3spacer)-3’。

2.如權利要求1所述的一種基于鎖核酸修飾的RMA法檢測CYP2C9和VKORC1基因多態性的引物探針組，其特征在于，所述探針修飾有熒光基團和猝滅基團，所述猝滅基團修飾在THF 3’端的T堿基上，熒光基團修飾在SNP位點的5’端T堿基上或SNP位點互補堿基的5’端T堿基上。

3.如權利要求2所述的一種基于鎖核酸修飾的RMA法檢測CYP2C9和VKORC1基因多態性的引物探針組，其特征在于，所述熒光基團用FAM、TET、ROX或CY5修飾，所述淬滅基團都用BHQ修飾。

4.如權利要求2所述的一種基于鎖核酸修飾的RMA法檢測CYP2C9和VKORC1基因多態性的引物探針組，其特征在于，所述探針3’末端標記阻抑聚合酶延伸或擴增的修飾基團。

5.如權利要求1所述的一種基于鎖核酸修飾的RMA法檢測CYP2C9和VKORC1基因多態性的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括含有擴增反應試劑A的檢測管、含有擴增反應試劑B的檢測管、緩沖液、醋酸鎂、陽性對照、陰性對照。