[發(fā)明專利]一種泉水魚精子高效超低溫冷凍保存方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 202110227761.0 | 申請日： | 2021-03-01 |
| 公開（公告）號： | CN112715534A | 公開（公告）日： | 2021-04-30 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 胡鵬;呂云云;劉德;周曉莉;胡燕;謝尚君 | 申請（專利權(quán)）人： | 內(nèi)江師范學(xué)院 |
| 主分類號： | A01N1/02 | 分類號： | A01N1/02 |
| 代理公司： | 北京化育知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11833 | 代理人： | 尹均利 |
| 地址： | 641000 *** | 國省代碼： | 四川;51 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 泉水 精子 高效 超低溫 冷凍 保存 方法 | ||
1.一種泉水魚精子高效超低溫冷凍保存方法，其特征在于：
將泉水魚的精液與抗凍液按體積比1:30的比例混合，混合后經(jīng)過程序降溫處理，最終投入到液氮(-196℃)，分裝保存；抗凍液由稀釋液、抗凍劑和添加劑三部分組成，其中稀釋液由NaCl、KCl、CaCl2·6H2O、NaHCO3、葡萄糖和果糖組成，抗凍劑為30％(V/V)甲醇，添加劑為15％(V/V)蜂蜜。
2.按權(quán)利要求1所述的泉水魚精子高效超低溫冷凍保存方法，其特征在于：所述稀釋液由NaCl、KCl、CaCl2·6H2O、葡萄糖和果糖組成：制備方法為取NaCl1.5g，KCl0.01g，CaCl2·6H2O0.1g，NaHCO30.1g，葡萄糖8.5g，果糖3.0g，溶于800mL雙蒸水，熱壓消毒，冷卻，定容至1000mL，即成稀釋液。
3.按權(quán)利要求1所述的泉水魚精子高效超低溫冷凍保存方法，其特征在于：所述抗凍液是將抗凍保護(hù)劑與稀釋液混合，制成比例為30％甲醇(V/V)的混合液，并置于4℃冰箱備用。
4.按權(quán)利要求1所述的泉水魚精子高效超低溫冷凍保存方法，其特征在于：將新鮮的泉水魚精液與抗凍液按照1:30的體積比混合均勻，移液槍吸取2mL混合液加入到2.5mL的凍存管中。
5.按權(quán)利要求1所述的泉水魚精子高效超低溫冷凍保存方法，其特征在于：用移液槍吸取300μL新鮮蜂蜜加入到凍存管中，充分混勻，隨后放入4℃冰箱預(yù)冷5min。
6.按權(quán)利要求1所述的泉水魚精子高效超低溫冷凍保存的方法，其特征在于：將分裝后的精液采用三步程序降溫法降溫處理，再投入液氮中長期保存，程序降溫程序為0～-40℃區(qū)間，-5℃/min；-40～-70℃區(qū)間，-10℃/min；-70～-130℃區(qū)間，-20℃/min。
7.按權(quán)利要求1所述的泉水魚精子高效超低溫冷凍保存方法，其特征在于：將分裝保存于液氮中的泉水魚凍精進(jìn)行解凍，具體方法為：解凍時用鑷子將凍存管從液氮中取出，空氣中停留3-5秒，然后迅速將凍存管放入25℃恒溫水浴鍋中水浴解凍，輕輕晃動至只剩一點冰核時取出。
8.按權(quán)利要求1所述的泉水魚精子高效超低溫冷凍保存方法，其特征在于：吸取精液，在生理鹽水中激活，鏡檢其活力，然后用計算機(jī)輔助精子分析(CASA)系統(tǒng)計算精子運動率等指標(biāo)。
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