[發明專利]一種五香粉中植物源性成分鑒別方法

在審

• 申請號: 202110226411.2
• 申請日: 2021-03-01
• 公開（公告）號: CN112813149A
• 公開（公告）日: 2021-05-18
• 發明（設計）人: 邢冉冉;陳穎;周夢月;張九凱;于寧
• 申請（專利權）人: 中國檢驗檢疫科學研究院
• 主分類號: C12Q1/686
• 分類號: C12Q1/686
• 代理公司: 北京天盾知識產權代理有限公司 11421
• 代理人: 宋凌林

本發明涉及食品質量安全檢測技術領域，具體公開了一種基于高通量測序技術的五香粉中植物源性成分鑒別方法，包括提取五香粉基因組DNA，用帶有堿基標簽的ITS2和psbA?trnH基因通用引物對提取基因組DNA進行多重PCR擴增，構建測序文庫、高通量測序、數據處理、結果評判等主要步驟。本方法可以通過一次檢測鑒定出五香粉產品中的多種植物源性成分，具有檢測范圍廣、檢測通量高、靈敏度高等優點。

技術領域

本發明屬于食品質量安全檢測技術領域，具體而言，涉及一種基于高通量測序技術的五香粉中植物源性物種成分鑒別方法。

背景技術

五香粉，也稱五香面，是一種傳統的中式復合調味料，是將五種及五種以上香辛料干品粉碎后，按一定比例混合而成，用以平衡五種基本的口味(甜、酸、咸、苦、鮮)。五香粉廣受人們喜愛，是中國烹飪中使用最廣泛的食用香辛料。市售五香粉配方、口味均有較大差異，各生產廠家均有各自配方，且都保密，其主要調香原料大體有八角、桂皮、小茴香、砂仁、豆蔻、丁香、山奈、花椒、白芷、陳皮、草果、姜、高良姜、甘草等。五香粉以粉末狀形式售賣，原始性狀消失，且其原料多樣并多有混雜，消費者難以辨別其是否摻假，這讓不法分子有機可乘。一些生產經營者為了追求經濟利益，多以廉價的、顏色相近的物質摻入其中，如廉價的農作物(谷糠、麩皮、玉米粉)和外部表形特征相似的物種。

由于五香粉中的物種原始特征已經消失，依據其外部形態和感官特征進行鑒別難度很大。加上五香粉成分復雜，導致摻假隱蔽，難以檢測。最常用的理化分析方法，如色譜法和光譜法，主要是根據樣品中的特異性化學組成來進行真偽鑒別，而生物體的成分容易受到季節、產地和環境等因素的影響，容易導致結果判定的不準確性。此外對于加工后的五香粉樣品，由于其化學結構和組成發生了變化，并且產品中可能摻雜了其他配料，給化學組分的分離純化和結構鑒定帶來了困難，因此該方法的應用就存在一定的局限性。目前常用的基于DNA的分子檢測方法通常一次只能檢測出一種或者少數幾種物種，而不能快速準確分析出大量的物種信息。當樣本數量很大時，需要花費很大的物力和人力。另外，當待測樣品是混合物或者未知樣品時，生物體的分離比較困難，加之物種的原始特征已經消失，這些現有的食品物種成分鑒別技術，無論從涉及的原料產品范圍，還是從方法的適用性等方面，都遠遠無法滿足現實的需求。

因此，本領域迫切需要開發一種高通量、高準確性、高質量的五香粉中植物源性成分鑒別方法，以實現非靶標多物種篩查的目的，破解目前的“黑箱”難題，來滿足目前的市場需求。

發明內容

本發明的目的在于提供一種基于高通量測序技術的五香粉中植物源性物種成分來源鑒別方法，該方法可以通過一次檢測鑒定出五香粉產品中的所有植物源性成分，具有檢測范圍廣、檢測通量高、靈敏度高等優點。

為實現上述目的，本發明采取的技術方案是：

基于高通量測序技術的五香粉中植物源性成分鑒別方法，所述方法包括以下步驟：

(a)提供一待測樣品；

(b)從所述樣品中提取基因組DNA；

(c)用帶有堿基標簽的ITS2和psbA-trnH基因通用引物對(b)中所述基因組DNA進行多重PCR擴增，得到PCR擴增產物；

(d)對所述PCR擴增產物進行純化、定量檢測；

(e)用上一步驟中檢測合格的PCR擴增產物構建測序文庫并進行質量檢驗；

(f)對上一步測序文庫進行高通量測序，獲得ITS2和psbA-trnH基因片段序列；

(g)將上一步所得ITS2和psbA-trnH基因片段序列與本地ITS2和psbA-trnH基因序列數據庫和/或公共數據庫進行比對，根據測序序列與數據庫中序列的同源性確定五香粉樣品中的物種成分。

本發明所述五香粉樣品為一類將多種香辛料按一定比例混合而成的復合粉狀調味料。