[發(fā)明專利]一種五香粉中植物源性成分鑒別方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110226411.2
• 申請(qǐng)日: 2021-03-01
• 公開（公告）號(hào): CN112813149A
• 公開（公告）日: 2021-05-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 邢冉冉;陳穎;周夢(mèng)月;張九凱;于寧
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院
• 主分類號(hào): C12Q1/686
• 分類號(hào): C12Q1/686
• 代理公司: 北京天盾知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11421
• 代理人: 宋凌林

1.一種鑒定五香粉中植物源性物種成分的檢測(cè)方法，其特征在于，包括以下步驟：

(a)提供一待測(cè)樣品；

(b)從所述樣品中提取基因組DNA；

(c)用帶有堿基標(biāo)簽的ITS2和psbA-trnH基因通用引物對(duì)(b)中所述基因組DNA進(jìn)行多重PCR擴(kuò)增，得到PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；

(d)對(duì)所述PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行純化、定量檢測(cè)；

(e)用上一步驟中檢測(cè)合格的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物構(gòu)建測(cè)序文庫(kù)并進(jìn)行質(zhì)量檢驗(yàn)；

(f)對(duì)上一步測(cè)序文庫(kù)進(jìn)行高通量測(cè)序，獲得ITS2和psbA-trnH基因片段序列；

(g)將上一步所得ITS2和psbA-trnH基因片段序列與本地ITS2和psbA-trnH基因序列數(shù)據(jù)庫(kù)和/或公共數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行比對(duì)，根據(jù)測(cè)序序列與數(shù)據(jù)庫(kù)中參考序列的同源性確定五香粉樣品中的物種成分。

其中，在步驟(g)中，若待測(cè)五香粉擴(kuò)增所得ITS2和/或psbA-trnH基因片段某條測(cè)序序列與本地ITS2和psbA-trnH基因序列數(shù)據(jù)庫(kù)和/或公共數(shù)據(jù)庫(kù)中某一植物的某條序列一致性大于等于97％，則所述待測(cè)五香粉中含有該條序列在數(shù)據(jù)庫(kù)中所對(duì)應(yīng)的植物物種；若待測(cè)五香粉擴(kuò)增所得ITS2和/或psbA-trnH基因片段某條測(cè)序序列與本地ITS2和psbA-trnH基因序列數(shù)據(jù)庫(kù)和/或公共數(shù)據(jù)庫(kù)中某一植物的某條序列一致性小于97％，則所述待測(cè)五香粉中不含有或候選不含有該條序列在數(shù)據(jù)庫(kù)中所對(duì)應(yīng)的植物物種。

2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述五香粉樣品為一類將多種香辛料按一定比例混合而成的復(fù)合粉狀調(diào)味料。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，在步驟(c)中所述多重PCR反應(yīng)分1個(gè)或多個(gè)反應(yīng)體系完成。

4.如權(quán)力要求1所述的方法，其特征在于，所述方法設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照組。

5.如權(quán)力要求1所述的方法，其特征在于，在步驟(g)中生物信息學(xué)分析中分類學(xué)單元聚類(OTU)的閾值為97％；只有在至少2個(gè)重復(fù)中均檢測(cè)到該物種時(shí)，才認(rèn)為該物種存在于樣品中；對(duì)于標(biāo)簽中未標(biāo)注的物種，當(dāng)物種相對(duì)豐度高于0.2％時(shí)，才認(rèn)為存在于樣品中。