[發(fā)明專利]一株通過還原TCA途徑生產己二酸的工程菌株及其構建方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110226378.3
• 申請日: 2021-03-01
• 公開（公告）號: CN113046283B
• 公開（公告）日: 2023-06-13
• 發(fā)明（設計）人: 鄧禹;周勝虎;郝婷婷;毛銀;李國輝;趙運英
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N15/70;C12N15/65;C12N15/52;C12N15/53;C12P7/44;C12R1/19
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211
• 代理人: 林娟

1.一株產己二酸的工程菌株，其特征在于，以大腸桿菌為出發(fā)菌株，過表達編碼琥珀酰輔酶A合成酶α亞基的基因sucD，編碼富馬酸還原酶的基因frdABCD；所述大腸桿菌為E.?coli?Mad1415；所述基因sucD的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1所示；所述基因frdABCD的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.2所示；

所述工程菌株是以pACM4G質粒為載體；所述pACM4G載體是以質粒pACM4為模板，將氯霉素抗性基因CmR替換為慶大霉素抗性基因GmR；

所述pACM4G質粒上還含有編碼如SEQ?ID?NO.6所示啟動子P_ffs的核苷酸序列、編碼核苷酸序列如SEQ?ID?NO.8所示所的啟動子P_fnrF8、編碼如SEQ?ID?NO.7所示啟動子P_c的核苷酸序列、編碼如SEQ?ID?NO.5所示FNR基因的核苷酸序列；

所述啟動子P_fnrF8誘導表達基因sucD和frdABCD，所述啟動子P_ffs誘導表達富馬酸硝酸鹽還原蛋白FNR基因，所述P_c啟動子誘導表達基因GmR；

所述過表達的基因sucD、frdABCD在pACM4G質粒的Nde?I/Xho?I位點以單順反子結構進行組合串聯(lián)表達。

2.根據權利要求1所述的工程菌株，其特征在于，還過表達了編碼丙酮酸羧化酶的基因pyc；所述基因pyc的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.3所示。

3.根據權利要求2所述的菌株，其特征在于，所述過表達的基因sucD、frdABCD和pyc在pACM4G質粒的Nde?I/Xho?I位點以單順反子結構進行組合串聯(lián)表達。

4.一種生產己二酸的方法，其特征在于，應用權利要求1-3任一所述的工程菌株進行發(fā)酵。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，是將權利要求1-3任一所述的工程菌進行發(fā)酵，初始添加葡萄糖，前期好氧發(fā)酵，待葡萄糖耗盡，進行厭氧發(fā)酵，并補充葡萄糖。

6.權利要求1~3任一所述工程菌株或權利要求4或5所述方法在己二酸合成中的應用。