[發(fā)明專利]一種氨基酸高通量靶標(biāo)檢測方法及其應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110226104.4
• 申請日: 2021-03-01
• 公開（公告）號: CN113009030A
• 公開（公告）日: 2021-06-22
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 樓格爾;周敏;張昆;黃明旺;王雪;凌加焱;周曉青;王洪光
• 申請（專利權(quán)）人: 上海阿趣生物科技有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/72
• 代理公司: 上海微策知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 31333
• 代理人: 湯俊明

本發(fā)明提供一種氨基酸高通量靶標(biāo)檢測方法及其應(yīng)用。具體包括以下步驟：S1：代謝物的提取；S2：標(biāo)準(zhǔn)溶液的配置；S3：上機(jī)檢測及分析。本發(fā)明一種氨基酸高通量靶標(biāo)檢測方法能夠靈敏度高，能夠?qū)Χ喾N不同氨基酸進(jìn)行精確鑒別的同時，準(zhǔn)確測定其成分含量。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及氨基酸檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種氨基酸高通量靶標(biāo)檢測方法及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

人類為了生存必須攝取食物，維持機(jī)體的正常代謝活動。蛋白質(zhì)是生物功能的主要載體，也是人體所需要的營養(yǎng)物質(zhì)。氨基酸是蛋白的構(gòu)件分子，因此氨基酸參與生物多條代謝途徑并起著關(guān)鍵作用。通過分析氨基酸的含量來判斷氨基酸的代謝情況，可以幫助預(yù)防和確診眾多病癥，不僅能保護(hù)人體健康，還對調(diào)節(jié)各種生物生產(chǎn)代謝有序進(jìn)行有著重要意義。

但由于氨基酸的種類眾多，含量也各有不同，因此氨基酸的代謝產(chǎn)物分析存在眾多難點，其中如何在增加通量的同時高效準(zhǔn)確的測定氨基酸的代謝產(chǎn)物是目前需要解決的問題之一，本發(fā)明提供一種氨基酸高通量靶標(biāo)檢測方法在保證覆蓋多種氨基酸的情況下準(zhǔn)確的高效靈敏的檢測氨基酸代謝產(chǎn)物。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明的第一個方面提供了一種氨基酸高通量靶標(biāo)檢測方法，包括以下步驟：S1：代謝物的提取；S2：標(biāo)準(zhǔn)溶液的配置；S3：上機(jī)檢測及分析。

作為一種優(yōu)選的技術(shù)方案，所述步驟S1：

1)將待測樣置于EP管中，加入提取液，渦旋混合均勻；

2)進(jìn)行勻漿和冰水浴超聲，重復(fù)勻漿超聲步驟得到樣本液；

3)將樣本液靜置；

4)將靜置后的樣本液進(jìn)行離心；

5)取上清液至LC進(jìn)樣瓶中，用于UHPLC-MS/MS分析。

作為一種優(yōu)選的技術(shù)方案，所述提取液按體積比為乙腈：甲醇：水＝(1-3)：(1-3)：1配置。

作為更進(jìn)一步的一種優(yōu)選的技術(shù)方案，所述提取液按體積比為乙腈：甲醇：水＝2：2：1配置。

作為一種優(yōu)選的技術(shù)方案，所述提取液需在-20℃下進(jìn)行預(yù)冷。

作為一種優(yōu)選的技術(shù)方案，所述提取液含同位素內(nèi)標(biāo)混合物。

作為一種優(yōu)選的技術(shù)方案，所述重復(fù)勻漿超聲步驟的次數(shù)為2-5次。

作為一種優(yōu)選的技術(shù)方案，所述渦旋混合時間為20-40s。

作為一種優(yōu)選的技術(shù)方案，所述勻漿頻率為30-50Hz，所述勻漿時間為200-280s；冰水浴超聲時間為3-8min。

作為一種優(yōu)選的技術(shù)方案，所述靜置溫度為-50--30℃，所述靜置時間為0.5-1.5h。

作為一種優(yōu)選的技術(shù)方案，所述離心溫度為3-5℃,所述離心速度為10000-15000rpm，所述離心時間10-20min。

作為一種優(yōu)選的技術(shù)方案，所述步驟S2：將標(biāo)準(zhǔn)品于容量瓶中，分別配制成的標(biāo)準(zhǔn)品儲備液；取標(biāo)準(zhǔn)品儲備液于容量瓶中，配制成混合標(biāo)準(zhǔn)溶液；依次稀釋該標(biāo)準(zhǔn)溶液得一系列校準(zhǔn)溶液。

作為一種優(yōu)選的技術(shù)方案，所述標(biāo)準(zhǔn)品儲備液的濃度為10mmol/L。

作為一種優(yōu)選的技術(shù)方案，所述步驟S3中流動相條件：

液相色譜柱：ACQUITY UPLC BEH Amide，規(guī)格：100×2.1mm，粒徑：1.7μm；

液相色譜A相：0.5-1.5％體積分?jǐn)?shù)的甲酸水溶液，B相：0.5-1.5％體積分?jǐn)?shù)的甲酸/乙腈液；