[發明專利]一種氨基酸高通量靶標檢測方法及其應用

在審

• 申請號: 202110226104.4
• 申請日: 2021-03-01
• 公開（公告）號: CN113009030A
• 公開（公告）日: 2021-06-22
• 發明（設計）人: 樓格爾;周敏;張昆;黃明旺;王雪;凌加焱;周曉青;王洪光
• 申請（專利權）人: 上海阿趣生物科技有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/72
• 代理公司: 上海微策知識產權代理事務所(普通合伙) 31333
• 代理人: 湯俊明

1.一種氨基酸高通量靶標檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：S1：代謝物的提取；S2：標準溶液的配置；S3：上機檢測及分析。

2.根據權利要求1所述的一種氨基酸高通量靶標檢測方法，其特征在于，所述步驟S1：

1)將待測樣置于EP管中，加入提取液，渦旋混合均勻；

2)進行勻漿和冰水浴超聲，重復勻漿超聲步驟得到樣本液；

3)將樣本液靜置；

4)將靜置后的樣本液進行離心；

5)取上清液至LC進樣瓶中，用于UHPLC-MS/MS分析。

3.根據權利要求2所述的一種氨基酸高通量靶標檢測方法，其特征在于，所述提取液按體積比為乙腈：甲醇：水＝(1-3)：(1-3)：1配置。

4.根據權利要求2所述的一種氨基酸高通量靶標檢測方法，其特征在于，所述勻漿頻率為30-50Hz，所述勻漿時間為200-280s；冰水浴超聲時間為3-8min。

5.根據權利要求2所述的一種氨基酸高通量靶標檢測方法，其特征在于，所述靜置溫度為-50--30℃，所述靜置時間為0.5-1.5h。

6.根據權利要求1所述的一種氨基酸高通量靶標檢測方法，其特征在于，所述步驟S2：將標準品于容量瓶中，分別配制成的標準品儲備液；取標準品儲備液于容量瓶中，配制成混合標準溶液；依次稀釋該標準溶液得一系列校準溶液。

7.根據權利要求1所述的一種氨基酸高通量靶標檢測方法，其特征在于，，所述步驟S3中流動相條件：

液相色譜柱：ACQUITY UPLC BEH Amide，規格：100×2.1mm，粒徑：1.7μm；

液相色譜A相：0.5-1.5％體積分數的甲酸水溶液，B相：0.5-1.5％體積分數的甲酸/乙腈；

柱溫箱溫度為30-40℃；樣品盤設為3-5℃；進樣體積為0.5-1.5μL。

8.根據權利要求7所述的一種氨基酸高通量靶標檢測方法，其特征在于，所述步驟S3中流動相條件：

液相色譜A相：1％體積分數的甲酸水溶液，B相：1％體積分數的甲酸/乙腈；

柱溫箱溫度為35℃；樣品盤設為4℃；進樣體積為1μL。

9.根據權利要求1所述的一種氨基酸高通量靶標檢測方法，其特征在于，所述步驟S3中質譜條件：

離子源：AJS-ESI；檢測模式：多反應監測模式；

離子源參數：

正離子模式(+)下，Capillaryvoltage＝+4000V，nozzle voltage＝+500V，gas(N2)temperature＝300℃，gas(N2)flow＝5L/min，sheath gas(N2)temperature＝250℃，sheath gas flow＝11L/min，nebulizer＝45psi；

負離子模式(+)下，Capillaryvoltage＝-3500V，nozzle voltage＝-500V，gas(N2)temperature＝300℃，gas(N2)flow＝5L/min，sheath gas(N2)temperature＝250℃，sheath gas flow＝11L/min，nebulizer＝45psi。

10.一種根據權利要求1-9任一項所述的一種氨基酸高通量靶標檢測方法在生物化學、藥學和臨床研究上的應用。