[發明專利]一株產還原性脫鹵素酶的菌株及其應用

有效

• 申請號: 202110223546.3
• 申請日: 2021-03-01
• 公開（公告）號: CN112574933B
• 公開（公告）日: 2021-05-14
• 發明（設計）人: 馮志彬;張娟;燕蕊;陳泉炎;程仕偉
• 申請（專利權）人: 魯東大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N9/14;C12P17/12;C12R1/38
• 代理公司: 北京科家知識產權代理事務所(普通合伙) 11427
• 代理人: 沈小明

1.一株產還原性脫鹵素酶的菌株YtRDases-55，其特征在于所述菌株分類命名為假單胞菌Pseudomonas sp.，保藏單位：中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為：CGMCC No.21296，保藏日期2020年12月4日。

2.利用權利要求1所述菌株催化制備2,3-二氯吡啶的方法，其特征在于所述方法具體如下：

1）菌株活化：挑取菌種劃線接種至斜面培養基，于恒溫培養箱30℃培養16～24h；

2）液體發酵：挑取一環斜面活化菌株接種于裝有發酵培養基的培養容器中，轉速200r/min、溫度30℃，培養72h，8000r/min離心發酵液20min收集菌體細胞；

3）全細胞催化2,3,6-三氯吡啶制備2,3-二氯吡啶：將2,3,6-三氯吡啶加入體積比10%的甲醇水溶液中，2,3,6-三氯吡啶與甲醇水溶液的質量體積比為2g：1000ml-10g：1000ml，調pH至7.0，攪拌均勻，加入和甲醇水溶液等體積發酵液離心后收集的菌體進行反應，溫度37～60℃，維持轉速在50 r/min，反應3～10h。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于所述的斜面培養基的成分及終濃度：葡萄糖1g/L、酵母浸粉5 g/L，蛋白胨10 g/L、NaCl 5 g/L和瓊脂 20 g/L，調節含有上述成分溶液的pH為7.0，121℃高壓蒸汽滅菌20min即得到所述的斜面培養基。

4.根據權利要求2所述的方法，其特征在于所述的發酵培養基的成分及終濃度：葡萄糖5-20 g/L、2,3,6-三氯吡啶0.5 g/L、(NH₄)₂SO₄ 1-5g/L、KH₂PO₄ 0.5-2g/L、MgSO₄ 0.2-0.5g/L、維生素B₁ 1mg/L、生物素50μg/L、煙酰胺1mg/L、泛酸鈣 1mg/L、FeSO₄ 1.6 mg/L、CuSO₄ 94μg/L、ZnSO₄ 0.23mg/L、鉬酸鈉0.17mg/L、硼酸50μg/L和MnSO₄ 0.38 mg/L，調節含有上述成分溶液的pH為7.0-7.2，121℃高壓蒸汽滅菌20min即得到所述的發酵培養基。