[發(fā)明專利]一種山羊支原體肺炎二聯(lián)滅活疫苗及其制備方法在審
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 202110218977.0 | 申請(qǐng)日： | 2021-02-26 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN112972667A | 公開（公告）日： | 2021-06-18 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 陶立;李常挺;吳翠蘭;彭昊;馬春霞;蘭美益;鐘舒紅;李軍 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 廣西壯族自治區(qū)獸醫(yī)研究所 |
| 主分類號(hào)： | A61K39/02 | 分類號(hào)： | A61K39/02;A61K39/39;A61P31/04;C12N1/20;C12R1/35 |
| 代理公司： | 南寧深之意專利代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 45123 | 代理人： | 盧穎 |
| 地址： | 530004 廣西壯族*** | 國省代碼： | 廣西;45 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 山羊 支原體 肺炎 二聯(lián) 疫苗 及其 制備 方法 | ||
本發(fā)明公開一種山羊支原體肺炎二聯(lián)滅活疫苗及其制備方法，所述的疫苗含有綿羊肺炎支原體(MO)、絲狀支原體山羊亞種(MMC)以及蜂膠佐劑，采用以下方法制備而成：1、制備支原體培養(yǎng)基；2、支原體的擴(kuò)增培養(yǎng)；3、支原體培養(yǎng)物的滅活；4、滅活的支原體與蜂膠佐劑混合制成疫苗。本發(fā)明的疫苗可同時(shí)預(yù)防絲狀支原體山羊亞種(MMC)和綿羊肺炎支原體(MO)引起的疾病，避免單一病原制備疫苗顧此失彼的缺點(diǎn)，對(duì)不同生理狀況和年齡的山羊均安全，適用于不同品種、各種年齡的山羊。
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明屬于畜牧業(yè)動(dòng)物疫苗技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種山羊支原體肺炎二聯(lián)滅活疫苗及其制備方法。
背景技術(shù)
山羊支原體肺炎是指由支原體引起的發(fā)生于山羊的一種接觸性呼吸道傳染病，其臨診特征為高熱、咳嗽，胸和胸膜發(fā)生漿液性和纖維素性炎癥，取急性和慢性經(jīng)過，發(fā)病率在22％～30％，有的高達(dá)60％～80％，死亡率在15％～30％。
山羊支原體肺炎的防制面臨較大困難，主要原因是其病原學(xué)因素復(fù)雜。除了我國流行的優(yōu)勢病原絲狀支原體山羊亞種(MMC)和綿羊肺炎支原體(MO)外，目前世界上已報(bào)道的本病病原還包括山羊支原體山羊肺炎亞種、山羊支原體山羊亞種和絲狀支原體絲狀亞種大菌落型。這些病原之間無交叉保護(hù)，且各國流行的優(yōu)勢病原不盡相同，加上支原體基因組較小，同一種支原體也易發(fā)生變異而導(dǎo)致抗原差異，因此世界各國一般都根據(jù)本地具體流行情況針對(duì)性地研制適合于本地區(qū)的滅活疫苗進(jìn)行免疫預(yù)防。
由于流行于我國的山羊支原體肺炎病原絲狀支原體山羊亞種(MMC)和綿羊肺炎支原體(MO)之間缺乏交叉保護(hù)，而所致疾病臨床上很難區(qū)分，且常會(huì)混合感染，因此應(yīng)用單一病原制成的疫苗很難適應(yīng)我國生產(chǎn)實(shí)際，而目前我國還沒有可以同時(shí)預(yù)防這兩種病原的二聯(lián)滅活疫苗。
發(fā)明內(nèi)容
針對(duì)現(xiàn)有單一病原制成的疫苗存在的局限性，本發(fā)明提供一種可同時(shí)預(yù)防絲狀支原體山羊亞種(MMC)和綿羊肺炎支原體(MO)這兩種病原的二聯(lián)滅活疫苗及其制備方法，用于山羊支原體肺炎的免疫預(yù)防。
本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：
(一)一種山羊支原體肺炎二聯(lián)滅活疫苗，含有綿羊肺炎支原體(MO)、絲狀支原體山羊亞種(MMC)以及蜂膠佐劑。
所述的菌種從發(fā)病山羊肺組織分離取得，用于制備疫苗的菌種嚴(yán)格控制在其分離取得后傳8代以內(nèi)的代次，在培養(yǎng)基中生長活菌的滴度達(dá)1×109CCU/mL。
強(qiáng)毒菌株綿羊肺炎支原體菌株(GXFS20772)和絲狀支原體山羊亞種(GXNP1312)均由廣西壯族自治區(qū)獸醫(yī)研究所分離鑒定，并已經(jīng)向廣東省微生物菌種保藏中心申請(qǐng)保存。
所述的山羊支原體肺炎二聯(lián)滅活疫苗的制備方法，包括以下步驟：
(1)按照培養(yǎng)基量4％的比例分別將綿羊肺炎支原體(MO)和絲狀支原體山羊亞種(MMC)接種于各自的支原體培養(yǎng)基中，于37℃搖床培養(yǎng)5天，至菌液生長滴度達(dá)到1×107～1×109CCU/mL，得到初始制苗菌液；取初始制苗菌液于12000r/min下離心3min，棄上清液，沉淀用滅菌生理鹽水溶解，最終使綿羊肺炎支原體(MO)和絲狀支原體山羊亞種(MMC)的菌濃度均為4×109CCU/mL，得到綿羊肺炎支原體(MO)和絲狀支原體山羊亞種(MMC)制苗菌液；
(2)在綿羊肺炎支原體(MO)和絲狀支原體山羊亞種(MMC)制苗菌液中分別加入甲醛溶液，使甲醛溶液的終濃度均為0.15％；充分混勻，在37℃下滅活24～48h，期間搖瓶4～5次，得到滅活的綿羊肺炎支原體(MO)和絲狀支原體山羊亞種(MMC)菌液；將滅活后的綿羊肺炎支原體(MO)和絲狀支原體山羊亞種(MMC)制苗菌液接種于支原體培養(yǎng)基中，于37℃下培養(yǎng)5～7d，支原體培養(yǎng)基均無被接種支原體和其他微生物生長即判為滅活完全；
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