[發明專利]蛋白質的選擇性還原

在審

• 申請號: 202110215052.0
• 申請日: 2015-02-11
• 公開（公告）號: CN112979786A
• 公開（公告）日: 2021-06-18
• 發明（設計）人: D·L·梅亞
• 申請（專利權）人: 西雅圖基因公司
• 主分類號: C07K16/00
• 分類號: C07K16/00;C07K1/34;C07K1/113;C07K1/08;A61K47/68
• 代理公司: 上海一平知識產權代理有限公司 31266
• 代理人: 高一平;徐迅

1.一種選擇性還原完整抗體分子中一個或多個封端的工程化半胱氨酸殘基的方法，該方法包括：

a)使還原劑與完整抗體分子接觸，每個完整抗體分子具有至少一個封端的工程化半胱氨酸殘基和至少三個重-輕和重-重鏈間二硫鍵；

b)在足以使工程化半胱氨酸殘基脫封端并形成封端副產物的條件下，使還原劑與完整抗體分子反應；和

c)去除步驟b)中封端副產物；

從而形成脫封端的工程化半胱氨酸抗體制劑，并且基本上所有重-輕和重-重鏈間二硫鍵都保留在所述脫封端的工程化半胱氨酸抗體制劑中；和

其中一個或多個封端的工程化半胱氨酸殘基獨立地選自下組：氨基酸位置239、326和327。

2.根據權利要求1所述的方法，其中所述一個或多個封端的工程化半胱氨酸殘基獨立地選自下組：S239C、A327C和K326C。

3.根據權利要求1所述的方法，包括在去除所述封端副產物的同時向步驟b)補充額外的還原劑。

4.根據權利要求1所述的方法，其中步驟a)至c)在7.0至8.5的pH下進行。

5.根據權利要求1或權利要求3所述的方法，其中至少約75％的所述封端的半胱氨酸殘基是被脫封端的。

6.根據權利要求5所述的方法，其中至少約80％的封端的半胱氨酸殘基是被脫封端的。

7.根據權利要求1所述的方法，其中所述脫封端的工程化半胱氨酸抗體制劑包含選自以下的兩個或更多個成員：

完整抗體分子，其具有至少兩個脫封端的工程化半胱氨酸殘基且沒有封端的工程化半胱氨酸殘基；

完整抗體分子，其具有至少兩個封端的工程化半胱氨酸殘基且沒有脫封端的工程化半胱氨酸殘基；和

完整抗體分子，其具有至少一個封端的工程化半胱氨酸殘基和至少一個脫封端的工程化半胱氨酸殘基。

8.根據權利要求1所述的方法，其中至少80％的重-輕和重-重鏈間二硫鍵保留在脫封端的工程化半胱氨酸抗體制劑中。

9.根據權利要求1所述的方法，其中抗體制劑中存在的至少90％的游離硫醇來自工程化的半胱氨酸殘基。

10.根據權利要求1或3所述的方法，其中在步驟b)中去除所述封端副產物包括透析或滲濾。

11.根據權利要求1所述的方法，其中在步驟b)之前的每個完整抗體分子包含四個重-輕和重-重鏈間二硫鍵。

12.根據權利要求1或3所述的方法，其中，選擇所述還原劑和還原條件，以使完整抗體分子中存在的不超過約20％的重-輕和重-重鏈間二硫鍵在步驟b)中轉化成一對游離硫醇。

13.根據權利要求1或3所述的方法，其中，選擇所述還原劑和還原條件，以使完整抗體分子中存在的不超過約15％的重-輕和重-重鏈間二硫鍵在步驟b)中轉化成一對游離硫醇。

14.根據權利要求1或3所述的方法，其中，選擇所述還原劑和還原條件，以使完整抗體分子中存在的不超過約10％的重-輕和重-重鏈間二硫鍵在步驟b)中轉化成一對游離硫醇。

15.根據權利要求1或3所述的方法，其中，選擇所述還原劑和還原條件，以使完整抗體分子中存在的不超過約5％的重-輕和重-重鏈間二硫鍵在步驟b)中轉化成一對游離硫醇。

16.根據權利要求1所述的方法，其中每個完整抗體分子具有至少兩個工程化的半胱氨酸殘基。

17.根據權利要求1所述的方法，其中每個完整抗體分子具有四個工程化的半胱氨酸殘基。