[發明專利]一種SNP雜合樣本的半定量方法

在審

• 申請號: 202110205947.6
• 申請日: 2021-02-24
• 公開（公告）號: CN112899355A
• 公開（公告）日: 2021-06-04
• 發明（設計）人: 萬謙;蔣小輝;向俊蓓
• 申請（專利權）人: 成都新生命霍普醫學檢驗實驗室有限公司
• 主分類號: C12Q1/6869
• 分類號: C12Q1/6869
• 代理公司: 成都行之專利代理事務所(普通合伙) 51220
• 代理人: 史麗紅

1.一種SNP雜合樣本的半定量方法，其特征在于，包括如下步驟：1)合成兩個長度相同的DNA模板P-ctDNA-1和P-ctDNA-2，P-ctDNA-1和P-ctDNA-2的區別在于兩者序列僅在中部的同一位點存在SNP差異，即在該SNP位點上P-ctDNA-1和P-ctDNA-2的堿基不同；2)合成能通過PCR完全擴增P-ctDNA-1和P-ctDNA-2的引物P-ctDNA-3和引物P-ctDNA-4；3)按多種不同的比例混合P-ctDNA-1和P-ctDNA-2，得到P-ctDNA-2占比不同的DNA混合物；4)以步驟3)中混合物作為模板，以P-ctDNA-3和P-ctDNA-4為引物進行PCR擴增，然后回收條帶，再以P-ctDNA-3為引物進行Sanger一代DNA測序，獲得不同比例下SNP位點的測序圖譜。

2.根據權利要求1所述的一種SNP雜合樣本的半定量方法，其特征在于，步驟3)中按1：1、2：1、5：1、10：1、20：1的比例混合P-ctDNA-1和P-ctDNA-2，獲得P-ctDNA-2占比為50％、33.3％、16.7％、9.1％、4.8％的DNA混合物。

3.根據權利要求1所述的一種SNP雜合樣本的半定量方法，其特征在于，取待分析的SNP雜合樣本進行Sanger一代DNA測序，獲得SNP雜合樣本的DNA測序圖譜，對SNP雜合樣本的樣本雜合情況與步驟4)獲得的多個不同比例下SNP位點的測序圖譜進行對比分析，即獲得樣本的SNP雜合比例與測序圖譜的半定量對應關系。

4.根據權利要求1所述的一種SNP雜合樣本的半定量方法，其特征在于，模板P-ctDNA-1和P-ctDNA-2的長度均為90bp。