[發(fā)明專利]一種游離脂肪酸高通量靶標(biāo)檢測方法及應(yīng)用

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• 申請日: 2021-02-23
• 公開（公告）號: CN113030360A
• 公開（公告）日: 2021-06-25
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 鄧軍亮;黃強;秦歡歡;鄭思炎;趙志偉;周敏;張昆
• 申請（專利權(quán)）人: 上海百趣生物醫(yī)學(xué)科技有限公司
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88
• 代理公司: 上海微策知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 31333
• 代理人: 湯俊明

本發(fā)明公開了一種游離脂肪酸高通量靶標(biāo)檢測方法及應(yīng)用，包括以下步驟：S1樣品預(yù)處理：將樣品加入提取液和內(nèi)標(biāo)液，渦旋混勻后加入鋼珠，研磨、超聲后離心，取上清液A，氮氣吹干后，進行甲酯化反應(yīng)，渦旋混勻后靜置，氮氣吹干，加入復(fù)溶液，離心，所得上清液B為待檢測樣品；S2樣品檢測：設(shè)置氣相色譜和質(zhì)譜的檢測條件，進行樣品的檢測。本發(fā)明公開的一種游離脂肪酸高通量靶標(biāo)檢測方法適合食品中游離脂肪酸的檢測，尤其適合肉制品中游離脂肪酸的檢測。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物化學(xué)檢測分析領(lǐng)域，具體涉及一種游離脂肪酸高通量靶標(biāo)檢測方法及應(yīng)用。

背景技術(shù)

游離脂肪酸(FFA)是指非酯化的脂肪酸，血中的游離脂肪酸要是脂肪代謝的中間產(chǎn)物，是機體細胞能量代謝的重要代謝底物，過高的游離脂肪酸與代謝綜合征、動脈粥樣硬化、急性冠脈綜合征、心力衰竭等疾病的發(fā)生發(fā)展相關(guān)。

食品中的游離脂肪酸主要產(chǎn)生于加工或儲存的過程中，由磷脂和中性脂肪在中性脂肪酶和酸性脂肪酶的作用下水解形成，對食品的風(fēng)味的形成有直接的作用。但是食品中的游離脂肪酸時間過長會發(fā)生變質(zhì)，產(chǎn)生對人體有害的物質(zhì)，因此檢測食品中游離脂肪酸的含量既可以檢測食品的風(fēng)味也可以檢測食品是否變質(zhì)。因此建立檢測準確度和靈敏度高的檢測方法非常必要。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明第一個方面提供了一種游離脂肪酸高通量靶標(biāo)檢測方法，包括以下步驟：

S1樣品預(yù)處理：將樣品加入提取液和內(nèi)標(biāo)液，渦旋混勻后加入鋼珠，研磨、超聲后離心，取上清液A，氮氣吹干后，進行甲酯化反應(yīng)，渦旋混勻后靜置，氮氣吹干，加入復(fù)溶液，離心，所得上清液B為待檢測樣品。

S2樣品檢測：設(shè)置氣相色譜和質(zhì)譜的檢測條件，進行樣品的檢測。

進一步地，所述步驟S1的提取液為異丙醇、正己烷、甲醇、三氯甲烷中的一種或多種。

進一步地，所述步驟S1的內(nèi)標(biāo)液的濃度為1-10mg/L。

進一步地，所述步驟S1的甲酯化反應(yīng)的反應(yīng)溫度為15-35℃。

進一步地，所述步驟S1的甲酯化反應(yīng)的反應(yīng)時間為10-30min。

進一步地，所述步驟S1的復(fù)溶液為異丙醇、正己烷、甲醇、乙醚中的一種或多種。

進一步地，所述步驟S2的氣相色譜的進樣方式為分流模式。

進一步地，所述步驟S2的質(zhì)譜的離子檢測采用負離子檢測。

本發(fā)明的第二個方面提供了一種游離脂肪酸高通量靶標(biāo)檢測方法在食品中的應(yīng)用。

進一步地，所述游離脂肪酸高通量靶標(biāo)檢測方法在肉制品中的應(yīng)用。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益效果：

本發(fā)明選用甲醇和三甲基硅烷基重氮甲烷作為樣品預(yù)處理過程中甲酯化反應(yīng)劑，反應(yīng)條件溫和、反應(yīng)過程中不對樣品中的有機官能團產(chǎn)生影響，副產(chǎn)物生成少，經(jīng)過預(yù)處理后的樣品在本發(fā)明特殊的氣相色譜和質(zhì)譜的設(shè)置條件下，能有明顯的、分離度高的特征峰，同時本發(fā)明的檢測方法穩(wěn)定度好、準確度高、精確度好，能檢測多種游離脂肪酸，適用于肉制品中游離脂肪酸的檢測，尤其適用于香腸中游離脂肪酸的檢測。

附圖說明

1.圖1為標(biāo)準品GC-MS SIM離子流圖。

2.圖2為樣品K1-1按照實施例1檢測得到的GC-MS SIM離子流圖。

3.圖3為樣品K1-2按照實施例1檢測得到的GC-MS SIM離子流圖。

4.圖4為樣品K1-3按照實施例1檢測得到的GC-MS SIM離子流圖。