[發明專利]一種氨氧化細菌的接合轉移方法

在審

• 申請號: 202110199333.1
• 申請日: 2021-02-22
• 公開（公告）號: CN112961877A
• 公開（公告）日: 2021-06-15
• 發明（設計）人: 趙辰;李辰宇;王景峰;諶志強;邱志剛;王尚;薛斌;張曦;楊曉波
• 申請（專利權）人: 軍事科學院軍事醫學研究院環境醫學與作業醫學研究所
• 主分類號: C12N15/74
• 分類號: C12N15/74;C12N1/21;C12R1/01
• 代理公司: 北京慕達星云知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11465
• 代理人: 崔自京

1.一種氨氧化細菌的接合轉移方法，其特征在于，步驟包括：

(1)供體菌富集培養

將目的質粒導入供體菌中，得目的供體菌，而后將供體菌富集培養，得活化目的供體菌；

(2)氨氧化細菌富集培養

將氨氧化細菌富集培養，得活化氨氧化細菌；

(3)氨氧化細菌接合轉移

將活化目的供體菌和活化氨氧化細菌混合并加入緩沖液，調至活化目的供體細菌終濃度為2×10⁸cfu/ml，活化氨氧化細菌終濃度為10⁸cfu/ml；培養4h以上，得接合轉移菌液。

2.如權利要求1所述的一種氨氧化細菌的接合轉移方法，其特征在于，步驟(1)中，活化目的供體菌的濃度為10⁹cfu/mL。

3.如權利要求1所述的一種氨氧化細菌的接合轉移方法，其特征在于，步驟(2)中，活化氨氧化細菌的濃度為10⁹cfu/mL。

4.如權利要求1所述的一種氨氧化細菌的接合轉移方法，其特征在于，步驟(3)中，所述緩沖液成分包括：0.5g/L硫酸銨、2.0g/L磷酸氫二鉀、1.5g/L七水硫酸鎂、20g/L胰化蛋白胨、10g/L酵母提取物，1.0g/L七水合硫酸亞鐵和10.0g/L氯化鈉，溶液為水。

5.如權利要求1所述的一種氨氧化細菌的接合轉移方法，其特征在于，步驟(3)中，培養溫度為26℃。

6.如權利要求1所述的一種氨氧化細菌的接合轉移方法，其特征在于，步驟(3)中，轉速為100rpm。

7.如權利要求1所述的一種氨氧化細菌的接合轉移方法，其特征在于，還包括：(4)氨氧化細菌接合轉移的鑒定，具體步驟為：將權利要求1步驟(3)的接合轉移菌液置于選擇培養基中篩選，長出的紅色菌落，即為成功轉入目的質粒的氨氧化細菌。

8.如權利要求7所述的一種氨氧化細菌的接合轉移方法，其特征在于，選擇培養基包括：2.0g/L硫酸銨、0.75g/L磷酸氫二鉀、0.25g/L磷酸二氫鈉、0.01g/L七水硫酸鎂、0.03g/L硫酸錳、0.1g/L碳酸鈉和15g/L瓊脂粉、80mg/L氨芐青霉素、60mg/L卡那霉素和40mg/L鹽酸四環素，溶液為水。

9.如權利要求7所述的一種氨氧化細菌的接合轉移方法，其特征在于，培養溫度為26℃，培養時間為5-7天。