[發明專利]一種含有布拉迪酵母菌的開菲爾發酵劑的制備方法及應用

在審

• 申請號: 202110194430.1
• 申請日: 2021-02-20
• 公開（公告）號: CN112899195A
• 公開（公告）日: 2021-06-04
• 發明（設計）人: 束震
• 申請（專利權）人: 安徽旭辰生物科技有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/18;C12N1/16;C12M1/38;C12M1/12;C12M1/04;C12M1/00;B04B5/04;A23L2/84;A23L2/38;A23L2/39;A23C9/127;C12R1/145;C12R1/07;C
• 代理公司: 合肥正則元起專利代理事務所(普通合伙) 34160
• 代理人: 王俊曉

1.一種含有布拉迪酵母菌的開菲爾發酵劑的制備方法，其特征在于：該含有布拉迪酵母菌的開菲爾發酵劑包括如下等重量份的菌種：布拉迪酵母菌、丁酸梭菌、凝結芽孢桿菌、嗜酸乳桿菌、保加利亞乳酸桿菌、嗜熱鏈球菌、開菲爾乳桿菌、畢赤酵母、釀酒酵母和東方醋酸菌；

該含有布拉迪酵母菌的開菲爾發酵劑的制備方法包括如下步驟：

步驟S1：將無菌水、培養基A、培養基B、培養基C分別加入4個洗凈烘干的三角瓶中，加量到三角瓶的瓶身三分之二，使用三角瓶封口膜封口，放入高壓滅菌鍋，設置溫度115℃，滅菌30～35min，滅菌結束后取出置于4℃冰箱保存待用；

步驟S2：將培養罐A、培養罐B、培養罐C、培養罐D用高壓滅菌袋包好，放入高壓蒸汽滅菌鍋中，設置溫度121℃，滅菌20～30min，滅菌結束后取出裝有培養罐A、培養罐B、培養罐C、培養罐D的高壓滅菌袋，置于鼓風干燥箱，于70～80℃烘干5～10min，然后使用質量分數為75％的酒精噴灑高壓滅菌袋表面，轉移至無菌室的無菌操作臺，在進入無菌操作臺之前再噴灑一次質量分數為75％的酒精，同時將步驟S1置于冰箱保存待用三角瓶取出，瓶身使用質量分數為75％的酒精噴灑滅菌，然后轉移至上述無菌操作臺；

步驟S3：在無菌操作臺中打開培養罐A的罐蓋，將布拉迪酵母菌、畢赤酵母、釀酒酵母與培養基A加入培養罐A中，關閉罐蓋搖勻待用；打開培養罐B的罐蓋，將丁酸梭菌、凝結芽孢桿菌、嗜熱鏈球菌與培養基B加入培養罐B中，關閉罐蓋搖勻待用；打開培養罐C的罐蓋，將嗜酸乳桿菌、保加利亞乳酸桿菌、開菲爾乳桿菌、東方醋酸菌與培養基C加入培養罐C中，關閉罐蓋搖勻待用；打開培養罐D的罐蓋，將無菌水加入培養罐D中，待用；控制操作后的培養罐A、培養罐B、培養罐C以及培養罐D的質量比為1：1：1：1；

步驟S4：打開活化培養設備的紫外燈一(31)與紫外燈二(42)，進行紫外殺菌處理30～45min，關閉紫外燈一(31)與紫外燈二(42)，打開箱門一(11)，將培養罐A、培養罐B、培養罐C以及培養罐D分別加入活化培養設備的四個放罐筒(453)中，關閉箱門一(11)設置溫控器一(34)為溫度30～37℃，設置轉動電機(49)轉速為100～180r/min，發酵2～3d，期間換氣扇(33)工作進行換氣，然后將氣缸(46)降下，使離心盤(45)落入離心組件(41)的內部，然后齒輪(415)轉動，帶動蓋板(412)滑動，閉合離心組件(41)，然后啟動轉動電機(49)，設置轉速2000～2500r/min，設置溫控器二(411)溫度為0～5℃，離心10～15min，然后打開箱門二(12)，齒輪(415)反向轉動，打開蓋板(412)，然后取出培養罐A、培養罐B、培養罐C，在無菌操作臺中將培養罐A、培養罐B、培養罐C中的濃縮菌液取出混合，得到各活化菌株；

步驟S5：將原培養罐A、培養罐B、培養罐C中得到的各活化菌株分別加入放有滅菌的培養基A、培養基B、培養基C的發酵罐，均加入細胞保護劑，分別在溫度30℃、40℃、37℃條件下放大培養3-5d，培養結束后取出置于冷凍干燥箱于溫度-50～-40℃凍干24～36h，然后按等細胞數目混合，即得到一種含有布拉迪酵母菌的開菲爾發酵劑，所述培養基A、培養基B、培養基C的體積用量為發酵罐體積的五分之三。

2.根據權利要求1所述的一種含有布拉迪酵母菌的開菲爾發酵劑的制備方法，其特征在于：所述培養基A由如下步驟制成：

將土豆去皮切塊，置于鐵鍋中，加入去離子水煮沸，保持20～30min，結束后冷卻至室溫，使用紗布過濾，補充去離子水，控制最終土豆與去離子水的用量比為2g：10mL；然后加入無水葡萄糖，控制無水葡萄糖與去離子水的用量比為20g：1L；無水葡萄糖完全融化后，加入增殖因子A，即得到培養基A；

所述增殖因子A為0.1～0.3mg/mL鋅離子、0.04～0.06mg/mL的生物素以及0.05～0.06mg/mL的肌醇混合而得，所述增殖因子A的用量為去離子水體積的1％～3％。