[發明專利]一種高效液相色譜分離測定高純纈氨酸中雜氨基酸的方法

有效

• 申請號: 202110191041.3
• 申請日: 2021-02-20
• 公開（公告）號: CN112858522B
• 公開（公告）日: 2022-09-20
• 發明（設計）人: 劉勛
• 申請（專利權）人: 重慶工貿職業技術學院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/74
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種高效液相色譜分離測定高純纈氨酸中雜氨基酸的方法，其特征在于：所述雜氨基酸為丙氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸；

具體步驟如下：

步驟一：儀器與試劑的準備：在以下色譜條件下進行高效液相色譜分析，測定含有纈氨酸中雜氨基酸的含量：

色譜柱：C8，5μm,150×4.6 mm i.d.反相鍵合色譜柱；

流動相：體積比為20:80乙腈/戊烷磺酸鈉-磷酸鹽緩沖溶液的混合溶液，其中戊烷磺酸鈉的濃度為1 mmol/L，磷酸鹽緩沖溶液的濃度為10mmol/L，pH值為4.0；

流速：1.0mL/min；

柱溫：35℃；

檢測波長：204nm；

步驟二：制樣：稱取高純纈氨酸和工業級纈氨酸樣品適量，加水溶解，再以水定容至100mL，再通過0.45um微孔過濾器過濾，將濾液作為分析溶液進樣分析；

步驟三：色譜分析：采用六通進樣閥將制成的分析溶液20uL注入液相色譜儀中，記錄色譜圖，進行色譜分析。

2.根據權利要求1所述的一種高效液相色譜分離測定高純纈氨酸中雜氨基酸的方法，其特征在于：在步驟一中的流動相制作方法為：取戊烷磺酸鈉0.17g，磷酸二氫鉀1.36g，加水900mL溶解，滴加5%的稀磷酸至pH為4.0，再補加水至1000mL，此為戊烷磺酸鈉-磷酸鹽緩沖液，將乙腈與戊烷磺酸鈉-磷酸鹽緩沖液以體積比為20:80的比例混合，經0.45um微孔濾膜過濾，并超聲波脫氣，得到流動相溶液。

3.根據權利要求1所述的一種高效液相色譜分離測定高純纈氨酸中雜氨基酸的方法，其特征在于：在步驟二中的高純纈氨酸和工業級纈氨酸樣品的稱取量為1.00g，步驟二的進樣體積為20uL。