[發明專利]一個兼抗黃瓜花葉病毒和煙草花葉病毒的雙價弱毒疫苗

在審

• 申請號: 202110185728.6
• 申請日: 2021-02-11
• 公開（公告）號: CN112877302A
• 公開（公告）日: 2021-06-01
• 發明（設計）人: 原雪峰;張雅雯;劉珊珊;于成明
• 申請（專利權）人: 山東農業大學
• 主分類號: C12N7/01
• 分類號: C12N7/01;C12N7/04;C12N15/84;C12N15/66;A01N63/40;A01N63/60;A01P1/00;C12R1/94
• 代理公司: 濟南譽豐專利代理事務所(普通合伙企業) 37240
• 代理人: 薛鵬喜

本發明公開了一種兼抗黃瓜花葉病毒和煙草花葉病毒的雙價弱毒疫苗，所述雙價弱毒疫苗含有CMV_Fny分離物的突變型RNA2；所述CMV_Fny分離物的突變型RNA2是在CMV_Fny分離物的RNA2全長序列第2661位之后插入TAATAG以及一段煙草花葉病毒的保守序列；所插入的煙草花葉病毒的保守序列的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述CMV_Fny分離物的突變型RNA2的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。將本發明的雙價弱毒疫苗是將CMV_Fny分離物的突變型RNA2與含有CMV_Fny分離物RNA1和RNA3的質粒混合接種，可以預防黃瓜花葉病毒和煙草花葉病毒的危害。本發明的雙價弱毒疫苗對CMV和TMV具有交叉保護效果；為田間防治CMV和TMV引起的植物病毒病提供了疫苗材料和有效防治措施。

技術領域

本發明涉及植物病毒學和分子生物學技術領域，具體涉及一個兼抗黃瓜花葉病毒和煙草花葉病毒的雙價弱毒疫苗及其在防治黃瓜花葉病毒和煙草花葉病毒中的應用。

背景技術

病毒病是僅次于真菌病的第二大類植物病害，對絕大部分作物均造成不同程度的危害，植物病毒病的防治是研究熱點及難點問題。黃瓜花葉病毒(Cucumer mosaic virus，CMV)是目前已知的寄主范圍最廣的植物病毒之一，造成多種具有重要經濟價值的植物(農作物、園藝作物等)出現黃化、矮化、畸形等癥狀，嚴重影響其產量和品質(Mochizuki etal.,2012)。煙草花葉病毒(Tobacco mosaic virus，TMV)是危害煙草、番茄和馬鈴薯的主要病毒，侵染煙草可引起花葉及皰斑等癥狀，嚴重影響煙葉產量及品質(姜翰林等，2018)。

在自然界中，不同病毒侵染同一寄主植物后有時會加重病毒病的癥狀，這種現象叫做協生作用。植物病毒協生現象在自然界廣泛存在，黃瓜花葉病毒與煙草花葉病毒復合侵染造成的危害更大，因此，設計能夠兼抗兩種病毒的策略尤為重要。

對于植物病毒病的防治，最有效的方法是抗病品種的篩選與培育，但其存在育種周期長、抗病品種抗性易喪失等不足。另一種方法是弱毒交叉保護，是利用弱毒突變體侵染，誘導植物自身的免疫系統而防治后期侵染的同樣類型強病毒株系；是一種有效的病毒防治策略。弱毒突變體可以是天然存在的，也可以通過分子生物學手段進行人工制備。

一種弱毒突變體只能用來防治對應的強病毒，如果想同時防治不同的病毒，就需要幾種不同類型的弱毒突變體。但可以通過在一個骨架病毒中插入異源病毒片段，來達到既防治骨架病毒，又防治插入片段對應的病毒的效果，這種突變型病毒就是多價弱毒疫苗。以黃瓜花葉病毒為基礎病毒載體，能夠兼抗黃瓜花葉病毒和煙草花葉病毒的雙價弱毒疫苗目前還未見有報道。

發明內容

針對上述研究背景，本發明的目的是提供一種兼抗CMV和TMV的雙價弱毒疫苗，為田間防治CMV和TMV引起的植物病毒病提供了疫苗材料和有效防治措施。

為實現上述目的，本發明采用如下技術方案：

本發明的第一方面，提供一種兼抗黃瓜花葉病毒和煙草花葉病毒的雙價弱毒疫苗，所述雙價弱毒疫苗含有CMV_Fny分離物的突變型RNA2；所述CMV_Fny分離物的突變型RNA2是在CMV_Fny分離物的RNA2全長序列第2661位之后插入TAATAG以及一段煙草花葉病毒的保守序列；所插入的煙草花葉病毒的保守序列的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述CMV_Fny分離物的突變型RNA2的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

本發明的第二方面，提供上述兼抗黃瓜花葉病毒和煙草花葉病毒的雙價弱毒疫苗的構建方法，包括以下步驟：