[發明專利]一個兼抗黃瓜花葉病毒和煙草花葉病毒的雙價弱毒疫苗

在審

• 申請號: 202110185728.6
• 申請日: 2021-02-11
• 公開（公告）號: CN112877302A
• 公開（公告）日: 2021-06-01
• 發明（設計）人: 原雪峰;張雅雯;劉珊珊;于成明
• 申請（專利權）人: 山東農業大學
• 主分類號: C12N7/01
• 分類號: C12N7/01;C12N7/04;C12N15/84;C12N15/66;A01N63/40;A01N63/60;A01P1/00;C12R1/94
• 代理公司: 濟南譽豐專利代理事務所(普通合伙企業) 37240
• 代理人: 薛鵬喜

1.一種兼抗黃瓜花葉病毒和煙草花葉病毒的雙價弱毒疫苗，其特征在于，所述雙價弱毒疫苗含有CMV_Fny分離物的突變型RNA2；所述CMV_Fny分離物的突變型RNA2是在CMV_Fny分離物的RNA2全長序列第2661位之后插入TAATAG以及一段煙草花葉病毒的保守序列；所插入的煙草花葉病毒的保守序列的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述CMV_Fny分離物的突變型RNA2的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

2.權利要求1所述的兼抗黃瓜花葉病毒和煙草花葉病毒的雙價弱毒疫苗的構建方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)以CMV_Fny RNA2侵染性克隆質粒pCB301-CMV_Fny-R2為模板，利用反向PCR擴增技術獲得中間載體pCC_FR2-2bPTⅡ；所述中間載體pCC_FR2-2bPTⅡ是2661位之后插入TAATAG，然后再依次引入BamH I、SpeI和Sma I酶切位點；

(2)利用酶切和連接方法將SEQ ID NO.1所示的煙草花葉病毒的保守序列插入到中間載體pCC_FR2-2bPTⅡ中，即構建得到兼抗黃瓜花葉病毒和煙草花葉病毒的雙價突變型質粒載體pCC_FR2-2bPTⅡ-TM₂₀₇₉。

(3)將構建得到兼抗黃瓜花葉病毒和煙草花葉病毒的雙價突變型質粒載體pCC_FR2-2bPTⅡ-TM₂₀₇₉與含有CMV_Fny分離物的RNA1和RNA3的質粒混合接種。

3.權利要求1所述的兼抗黃瓜花葉病毒和煙草花葉病毒的雙價弱毒疫苗在防治黃瓜花葉病毒和煙草花葉病毒中的應用。

4.一種防治黃瓜花葉病毒和煙草花葉病毒的方法，其特征在于，包括以下步驟：

將權利要求1所述的兼抗黃瓜花葉病毒和煙草花葉病毒的CMV_Fny分離物的突變型RNA2與含有CMV_Fny分離物的RNA1和RNA3的質粒混合接種。