[發明專利]一種咖啡酸苯乙酯的分析方法

在審

• 申請號: 202110179384.8
• 申請日: 2021-02-09
• 公開（公告）號: CN112782319A
• 公開（公告）日: 2021-05-11
• 發明（設計）人: 呂久安;劉曄;盧蕾;管海全;尹碧瑩
• 申請（專利權）人: 北京歐德福瑞醫藥科技發展有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/28;G01N30/34;G01N30/54;G01N30/74
• 代理公司: 北京君智知識產權代理事務所(普通合伙) 11305
• 代理人: 黃綠雯

本發明提供了一種咖啡酸苯乙酯的分析方法，該分析方法包括對化學合成的藥用咖啡酸苯乙酯的待測試物進行HPLC分析，其中HPLC分析的色譜柱為十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱，流動相A為磷酸二氫鈉緩沖溶液，流動相B為甲醇。該方法得到的色譜圖中咖啡酸苯乙酯的峰形清晰、重現性好，且該方法具有分離度好、簡單快速、專屬性強、靈敏度高等特點。

技術領域

本發明涉及咖啡酸苯乙酯的檢測技術領域，具體而言，涉及一種化學合成的藥用咖啡酸苯乙酯的分析方法。

背景技術

蜂膠的化學成分非常復雜，長期以來，由于不能確定蜂膠的功能性成分，影響了蜂膠在現代醫藥上的應用。咖啡酸苯乙酯已經被鑒定為蜂膠中的主要組分之一，而且具有的藥理活性非常廣泛。咖啡酸苯乙酯的分子式為C17H16O4，化學結構式如下：

其結構中含有多酚羥基基團，具有清除自由基的潛在功能。有文獻報道，鄰二酚羥基結構具有體內抗氧化作用。研究表明，含有咖啡酸苯乙酯的蜂膠乙醇提取液可以抑制角叉菜膠誘導的佐劑性關節炎、胸膜炎和大鼠足腫脹，而不含咖啡酸苯乙酯的提取液不具有這一活性，說明咖啡酸苯乙酯是發揮抗炎作用的主要組分。由于咖啡酸苯乙酯具有極強的抗炎和抗氧化活性，從而可以起到抗腫瘤的作用，所以在醫學上具有廣闊的應用前景。

中國專利申請201711457604.9公開了一種軟膠囊標志性成分的檢測方法，它是通過HPLC測定人參蜂膠軟膠囊中7種標志性成分的方法，其中的一種成分為咖啡酸苯乙酯。該方法主要針對的是人參蜂膠軟膠囊中咖啡酸苯乙酯含量的檢測方法，所存在的問題是，流動相A為0.15％磷酸溶液，其緩沖能力較差，獲得的咖啡酸苯乙酯和雜質的峰形不佳；流動相B為乙腈，其洗脫能力較強，難以將咖啡酸苯乙酯與雜質有效地進行分離。總體來說，該發明對于雜質分析專屬性較差，峰形不佳。因此，本領域迫切需要一種針對化學合成的藥用咖啡酸苯乙酯有關物質進行檢測的可靠的分析方法，以實現對化學合成的藥用咖啡酸苯乙酯質量進行有效的控制。

發明內容

本發明的主要目的在于提供一種咖啡酸苯乙酯的分析方法，以解決現有技術中采用HPLC分析方法難以達到咖啡酸苯乙酯與雜質的有效分離的問題。

為了實現上述目的，根據本發明的一個方面，提供了一種咖啡酸苯乙酯的分析方法，包括對化學合成的藥用咖啡酸苯乙酯的待測試物進行HPLC分析，所述HPLC分析的色譜柱為十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱，所述HPLC分析的過程包括將所述含咖啡酸苯乙酯的待測試物在色譜柱中進行梯度洗脫，流動相包括流動相A磷酸二氫鈉緩沖溶液和流動相B甲醇，所述磷酸二氫鈉緩沖溶液的濃度為0.01mol/L～0.03mol/L，用磷酸調pH值為2-4。

梯度洗脫條件為0-70min，35％B→70％B；70-80min，70％B；80.1-95min，35％B，所述梯度洗脫見表1。

表1

所述磷酸二氫鈉緩沖溶液和甲醇流動相的起始比例體積比為30:70:～40:60，優選體積比為35:65。

所述十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱的填料粒度為3μm、5μm，優選為5μm。

所述十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱的柱長為250mm，所述十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱的柱內徑為4.6mm。

所述HPLC分析的檢測波長為210～220nm，優選為215nm。

所述十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱的進樣量為10～30μL，優選為20μL。色譜柱都有一定的承載量，進樣量小于特定色譜儀的靈敏度會導致無法準確定量，進樣量太大會導致過載，不僅損害色譜柱，還導致峰型拖尾，因此，為更精確地適應本申請的上述十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱對咖啡酸苯乙酯的有效分析，優選上述范圍內的進樣量。