[發明專利]木聚糖酶突變體及其制備方法與應用

有效

• 申請號: 202110178825.2
• 申請日: 2021-02-07
• 公開（公告）號: CN112708608B
• 公開（公告）日: 2021-08-10
• 發明（設計）人: 游帥;張溫馨;查子千;謝晨;葛研;胡洋浩;王俊
• 申請（專利權）人: 江蘇科技大學
• 主分類號: C12N9/24
• 分類號: C12N9/24;C12N15/56;C12N15/81;C12N1/19;C12P19/14;A23K20/189;C12R1/84
• 代理公司: 北京東方盛凡知識產權代理事務所(普通合伙) 11562
• 代理人: 王穎

1.木聚糖酶突變體，其特征在于，以木聚糖酶HwXyl10A為母本對Gly363位點飽和突變后得到2種高比活耐熱木聚糖酶突變體HwXyl10A_G363R和HwXyl10A_G363K，所述HwXyl10A_G363R的氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示；所述HwXyl10A_G363K的氨基酸序列如SEQ ID NO：6所示。

2.編碼權利要求1所述的木聚糖酶突變體的核苷酸序列。

3.如權利要求2所述的核苷酸序列，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO：3或SEQID NO：5所示。

4.一種重組載體，其特征在于，所述重組載體包括權利要求3所述的核苷酸序列。

5.一種重組菌株，其特征在于，包括權利要求4所述的重組載體或者在所述重組菌株的基因組中整合有權利要求3所述的核苷酸序列。

6.一種如權利要求1所述的木聚糖酶突變體的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟1：以含有木聚糖酶基因HwXyl10a的重組表達載體pic9r-HwXyl10a為模板，采用定點突變的方法對Gly363位點進行飽和突變，獲得含有木聚糖酶突變體的重組表達載體；

步驟2：所得木聚糖酶突變體重組表達載體轉化畢赤酵母菌，獲得畢赤酵母重組菌株；

步驟3：發酵培養畢赤酵母重組菌株，誘導重組木聚糖酶表達；

步驟4：回收并純化高比活耐熱的木聚糖酶突變體。

7.如權利要求6所述的木聚糖酶突變體的制備方法，其特征在于，所述畢赤酵母為畢赤酵母GS115。

8.一種如權利要求1所述的木聚糖酶突變體利用生物質降解木聚糖產糖中的應用。

9.一種如權利要求1所述的木聚糖酶突變體在降解飼料添加中的木聚糖中的應用。