[發明專利]一種凱倫藻科多物種的快速檢測方法

在審

• 申請號: 202110178198.2
• 申請日: 2021-02-09
• 公開（公告）號: CN112795689A
• 公開（公告）日: 2021-05-14
• 發明（設計）人: 邱麗梅;張偉倩;張令帥;尹肖婷;劉青;張清春
• 申請（專利權）人: 中國科學院海洋研究所
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標代理有限公司 21002
• 代理人: 李穎

1.一種快速檢測凱倫藻科多物種的引物對，其特征在于：凱倫藻屬特異性引物為：

上游引物KMF2 5′-ATTGTGMACCAYCTKMTGT-3′，

下游引物KMR1 5′-ACAAGWTGACAGTGGCATG-3′；

卡爾藻屬和塔卡藻屬特異性引物為：

上游引物KAKVF1 5′-AYTGTGAMCYWCTTYGTGAG-3′，

下游引物KAKVR2 5′-ACMCMTGACAGCACCAAG-3′。

2.一種快速檢測凱倫藻科多物種的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒含權利要求1所述引物對。

3.一種凱倫藻科多物種的快速檢測方法，其特征在于：利用權利要求1所述的凱倫藻屬、卡爾藻屬和塔卡藻屬的特異性引物，通過PCR擴增和瓊脂糖凝膠電泳對海水中的凱倫藻科多物種進行檢測；

其中，凱倫藻屬特異性引物為：

上游引物KMF2 5′-ATTGTGMACCAYCTKMTGT-3′，

下游引物KMR1 5′-ACAAGWTGACAGTGGCATG-3′；

卡爾藻屬和塔卡藻屬特異性引物為：

上游引物KAKVF1 5′-AYTGTGAMCYWCTTYGTGAG-3′，

下游引物KAKVR2 5′-ACMCMTGACAGCACCAAG-3′。

4.按權利要求1所述的凱倫藻科多物種的快速檢測方法，其特征在于：以海水樣品中藻基因組總DNA為模版，利用兩對特異性引物通過PCR擴增、瓊脂糖凝膠電泳對海水中的凱倫藻科多物種進行檢測。

5.按權利要求4所述的凱倫藻科多物種的快速檢測方法，其特征在于：所述PCR反應體系為：反應總體積為20μL，包括基因組DNA 1μL，Fly Buffer 4μL，dNTP1.6μL，TransStartFastPfu Fly DNA Polymerase 0.4μL(Transgen)，引物各0.4μL(濃度10μM)，最后加滅菌去離子水至20μL。

6.按權利要求4所述的凱倫藻科多物種的快速檢測方法，其特征在于：所述PCR反應程序為95℃預變性2min；95℃變性15s，49℃退火20s，72℃延伸15s，35個循環；72℃終延伸5min。

7.按權利要求3-6任意一項所述的凱倫藻科多物種的快速檢測方法，其特征在于：利用引物KMF2和KMR1對樣品進行檢測，待400bp左右出現條帶，即樣品中含凱倫藻；利用引物KAKVF1和KAKVR2對樣品進行檢測，待400bp左右出現條帶，即樣品中含卡爾藻或塔卡藻。