[發(fā)明專利]一種凱倫藻科多物種的快速檢測(cè)方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110178198.2
• 申請(qǐng)日: 2021-02-09
• 公開（公告）號(hào): CN112795689A
• 公開（公告）日: 2021-05-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 邱麗梅;張偉倩;張令帥;尹肖婷;劉青;張清春
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院海洋研究所
• 主分類號(hào): C12Q1/6895
• 分類號(hào): C12Q1/6895;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標(biāo)代理有限公司 21002
• 代理人: 李穎

本發(fā)明屬于海洋生物技術(shù)領(lǐng)域，一種凱倫藻科多物種的快速檢測(cè)方法。采用兩對(duì)特異性引物，可分別對(duì)海水中的凱倫藻科凱倫藻屬、卡爾藻屬、塔卡藻屬物種進(jìn)行檢測(cè)和監(jiān)控，其中凱倫藻屬特異性引物為引物KMF2和KMR1，卡爾藻屬和塔卡藻屬特異性引物為引物KAKVF1和KAKVR2。檢測(cè)方法包括藻基因組DNA提取、PCR擴(kuò)增和電泳檢測(cè)。其優(yōu)點(diǎn)是簡單快速、特異性強(qiáng)、檢測(cè)范圍寬等。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于海洋生物技術(shù)領(lǐng)域，一種凱倫藻科多物種的快速檢測(cè)方法。

背景技術(shù)

凱倫藻科(Kareniaceae)是甲藻門中較近建立的一個(gè)新科，凱倫藻科種類廣泛分布于全球各大海域，到目前為止，已報(bào)道3屬30個(gè)種。由于該科是有毒有害甲藻種類較為聚集的一個(gè)類群，且大部分種類頻發(fā)藻華，嚴(yán)重威脅近海海域生態(tài)安全和水產(chǎn)養(yǎng)殖，因而備受各方關(guān)注。從20世紀(jì)90年代開始，我國近海海域也逐漸成為凱倫藻藻華的重災(zāi)區(qū)，凱倫藻曾引發(fā)我國最嚴(yán)重的幾次藻華事件，給沿海地區(qū)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。研究凱倫藻赤潮，進(jìn)行赤潮預(yù)警和日常監(jiān)測(cè)，對(duì)于減少水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)損失，保護(hù)海洋生態(tài)環(huán)境，有著重要的實(shí)際意義。

對(duì)赤潮進(jìn)行預(yù)測(cè)首要問題是對(duì)引起赤潮的藻類進(jìn)行檢測(cè)。形態(tài)鑒別是傳統(tǒng)的鑒別方法，但由于一些藻類的不同種屬的形態(tài)差別甚微，難以準(zhǔn)確鑒別。另一方面，環(huán)境對(duì)藻類的形態(tài)有很大的影響，鑒定到種存在的困難很多。目前，利用分子生物學(xué)手段檢測(cè)微藻的方法日漸成熟，這些方法從分子水平解決了某些從形態(tài)上難以區(qū)分的藻類分類和鑒定問題。目前針對(duì)赤潮原因種的分子鑒定方法的研究已有很大進(jìn)展，但針對(duì)引發(fā)赤潮的凱倫藻科多物種的分子鑒定技術(shù)尚待發(fā)展，因此需要建立一種特異穩(wěn)定的、適用于凱倫藻絕大多數(shù)物種的早期監(jiān)控及檢測(cè)的技術(shù)手段。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明目的在于提供一種檢測(cè)速度快、特異性高、靈敏穩(wěn)定的快速檢測(cè)凱倫藻科多物種的快速檢測(cè)方法。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用技術(shù)方案為：

一種快速檢測(cè)凱倫藻科多物種的引物對(duì)，凱倫藻屬特異性引物為：

上游引物KMF2 5′-ATTGTGMACCAYCTKMTGT-3′，

下游引物KMR1 5′-ACAAGWTGACAGTGGCATG-3′；

卡爾藻屬和塔卡藻屬特異性引物為：

上游引物KAKVF1 5′-AYTGTGAMCYWCTTYGTGAG-3′，

下游引物KAKVR2 5′-ACMCMTGACAGCACCAAG-3′。

一種快速檢測(cè)凱倫藻科多物種的試劑盒，所述試劑盒含所述引物對(duì)。

一種凱倫藻科多物種的快速檢測(cè)方法，利用所述的凱倫藻屬、卡爾藻屬和塔卡藻屬的特異性引物，通過PCR擴(kuò)增和瓊脂糖凝膠電泳對(duì)海水中的凱倫藻科多物種進(jìn)行檢測(cè)；

其中，凱倫藻屬特異性引物為：

上游引物KMF2 5′-ATTGTGMACCAYCTKMTGT-3′，

下游引物KMR1 5′-ACAAGWTGACAGTGGCATG-3′；

卡爾藻屬和塔卡藻屬特異性引物為：

上游引物KAKVF1 5′-AYTGTGAMCYWCTTYGTGAG-3′，

下游引物KAKVR2 5′-ACMCMTGACAGCACCAAG-3′。

以海水樣品中藻基因組總DNA為模版，利用兩對(duì)特異性引物通過PCR擴(kuò)增、瓊脂糖凝膠電泳對(duì)海水中的凱倫藻科多物種進(jìn)行檢測(cè)。