[發明專利]禾谷縊管蚜實時熒光定量PCR檢測的內參基因及其擴增引物和應用

在審

• 申請號: 202110178176.6
• 申請日: 2021-02-09
• 公開（公告）號: CN112746115A
• 公開（公告）日: 2021-05-04
• 發明（設計）人: 朱勛;李孟奕;楊峰山;張云慧;李祥瑞;李新安;龔培盼;王超;李秋池;朱賽格;殷新田
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院植物保護研究所
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/6851;C12N15/11
• 代理公司: 北京思元知識產權代理事務所(普通合伙) 11598
• 代理人: 余光軍;霍雪梅

1.EF-1α、β-actin、AK、TATA、GAPDH、GST、RPL13、RPS6、RPS18、18S或28S基因作為內參基因應用于禾谷縊管蚜基因表達實時熒光定量PCR檢測中的用途。

2.按照權利要求1所述的用途，其特征在于，EF-1α、β-actin、AK、TATA、GAPDH、GST、RPL13、RPS6、RPS18、18S或28S基因作為內參基因應用于禾谷縊管蚜功能基因表達、不同發育階段、不同地理種群、不同身體部位、不同翅型或不同處理條件下基因表達的實時熒光定量PCR檢測中的用途。

3.按照權利要求2所述的用途，其特征在于，β-actin或GAPDH基因片段作為內參基因應用于禾谷縊管蚜功能基因或不同發育階段或殺蟲劑處理基因表達的實時熒光定量PCR檢測；

或者，AK或TATA基因片段作為內參基因應用于禾谷縊管蚜功能基因或不同地理種群基因表達的實時熒光定量PCR檢測；

或者，RPS18或RPL13基因片段作為內參基因應用于禾谷縊管蚜功能基因或不同身體部位基因表達的實時熒光定量PCR檢測時；

或者，TATA或GAPDH基因片段作為內參基因應用于禾谷縊管蚜功能基因或不同翅型基因表達的實時熒光定量PCR檢測；

或者，EF-1α或RPS6基因片段作為內參基因應用于禾谷縊管蚜功能基因或抗生素處理條件下基因表達的實時熒光定量PCR檢測；

或者，GAPDH、TATA或RPS18基因片段作為內參基因應用于禾谷縊管蚜功能基因或饑餓處理條件下基因表達的實時熒光定量PCR檢測；

或者，TATA、RPS6或AK基因片段作為內參基因應用于禾谷縊管蚜功能基因或不同溫度處理條件下基因表達的實時熒光定量PCR檢測。

4.一種禾谷縊管蚜不同發育階段或經殺蟲劑處理基因表達的實時熒光定量PCR檢測方法，包括：提取禾谷縊管蚜基因組總RNA，進行RT反應反應得到產物第一鏈cDNA，以產物第一鏈cDNA作為模板進行實時熒光定量PCR擴增，熒光染料為SYBR Green，其特征在于，所述實時熒光定量PCR擴增的定量引物為用于擴增β-actin基因的定量引物，其核苷酸序列為SEQID No.3和SEQ ID No.4所示；或者為用于擴增GAPDH基因的定量引物，其核苷酸序列為SEQID No.9和SEQ ID No.10所示。

5.一種禾谷縊管蚜不同地理種群基因表達的實時熒光定量PCR檢測方法，包括：提取禾谷縊管蚜基因組總RNA，進行RT反應得到產物第一鏈cDNA，以產物第一鏈cDNA作為模板進行實時熒光定量PCR擴增，熒光染料為SYBR Green；其特征在于，所述實時熒光定量PCR擴增的定量引物為用于擴增AK基因的定量引物，其核苷酸序列為SEQ ID No.5和SEQ ID No.6所示；或者為用于擴增TATA基因的定量引物，其核苷酸序列為SEQ ID No.7和SEQ ID No.8所示。

6.一種禾谷縊管蚜不同身體部位基因表達的實時熒光定量PCR檢測方法，包括：提取禾谷縊管蚜基因組總RNA，進行RT反應反應得到產物第一鏈cDNA，以產物第一鏈cDNA作為模板進行實時熒光定量PCR擴增，熒光染料為SYBR Green，其特征在于，所述實時熒光定量PCR擴增的定量引物為用于擴增RPS18基因的定量引物，其核苷酸序列為SEQ ID No.17和SEQ IDNo.18所示；或者為用于擴增RPL13基因的定量引物，其核苷酸序列為SEQ ID No.13和SEQID No.14所示。

7.一種禾谷縊管蚜不同翅型基因表達的實時熒光定量PCR檢測方法，包括：提取禾谷縊管蚜基因組總RNA，進行RT反應反應得到產物第一鏈cDNA，以產物第一鏈cDNA作為模板進行實時熒光定量PCR擴增，熒光染料為SYBR Green，其特征在于，所述實時熒光定量PCR擴增的定量引物為用于擴增TATA基因的定量引物，其核苷酸序列為SEQ ID No.7和SEQ ID No.8所示；或者為用于擴增GAPDH基因的定量引物，其核苷酸序列為SEQ ID No.9和SEQ ID No.10所示。