[發明專利]一種腸粘膜炎動物模型的構建方法

有效

• 申請號: 202110175422.2
• 申請日: 2021-02-06
• 公開（公告）號: CN112970670B
• 公開（公告）日: 2022-08-05
• 發明（設計）人: 段繼峰;戴飛紅;俞誠;楊平
• 申請（專利權）人: 澎立生物醫藥技術（上海）股份有限公司
• 主分類號: A01K67/02
• 分類號: A01K67/02
• 代理公司: 北京天盾知識產權代理有限公司 11421
• 代理人: 宋凌林

本發明涉及一種腸粘膜炎動物模型的構建方法，對動物樣品的腸道進行菌群接種以誘導動物樣品腸道產生炎癥，對接種后的小鼠進行性狀觀察、生理生化指標檢測和直腸中段粘膜組織結構顯微觀察，當小鼠出現血便或粘液便、與炎癥因子相關的生理生化指標上升或直腸中段粘膜組織皮損或炎癥浸潤的癥狀時，即腸粘膜炎動物模型構建成功。通過控釋或緩釋的腸栓施用方式，解決施用過程中產生的不可控因素，將菌液接種的操作統一化和簡便化，使腸粘膜炎動物的模型構建實現可重復。

技術領域

本發明涉及生物醫療領域，尤其涉及一種腸粘膜炎動物模型的構建方法。

背景技術

腸炎是細菌、病毒、真菌和寄生蟲等引起的小腸炎和結腸炎。臨床表現主要有腹痛、腹瀉、稀水便或黏液膿血便。部分病人可有發熱及里急后重感覺，故亦稱感染性腹瀉。腸炎按病程長短不同，分為急性和慢性兩類。腸道炎的病因主要包含病毒性腸炎、細菌性腸炎、真菌性腸炎、寄生蟲性腸炎、飲食導致的腸炎以及抗生素導致的腸炎，其中，以痢疾桿菌、沙門菌、空腸彎曲菌以及大腸桿菌引起的細菌性腸炎最為常見。

目前用于腸炎疾病研究的動物模型主要分三類，包含自發性腸炎模型、誘發性腸炎模型和轉基因腸炎模型，根據王開、裴志花和胡桂學等人在中國免疫學雜志發表的一篇名為“腸炎動物模型”的文章記載，誘發性腸炎模型能夠從化學介質、病原菌誘導和免疫誘導三方面對動物模型進行腸炎疾病的誘發。專利號為CN108969513A的中國專利公開了一種肝郁脾虛證潰瘍性結腸炎動物模型的建立及應用，包括建模前對大鼠進行預游泳，剔除不合格的大鼠，將合格大鼠進行慢性束縛、過度勞累與飲食失節處理造模7天，第8天進行灌腸建立潰瘍性結腸炎模型，大鼠禁食不進水24h，腹腔注射麻醉后，將TNBS/乙醇溶液由大鼠肛門緩慢注入，倒立后將大鼠保持平躺狀態，放置干凈的鼠框內，自然清醒，第9天起大鼠繼續進行慢性束縛、過度勞累與飲食失節處理，至第28天即得肝郁脾虛證潰瘍性結腸炎動物模型。通過外接因素刺激使機體自身產生腸炎應激的現象無法持續進行藥理觀察，其治愈方式也無法作為典型范例為藥物實驗做科學依據。區別于身體因素刺激導致的腸炎，公開號為CN107950472A的中國專利公開了一種潰瘍性結腸炎動物模型的構建方法和應用。本發明的潰瘍性結腸炎動物模型以土狗為模型動物，采用醋酸致犬潰瘍性結腸炎，實驗結果基本能直接推廣應用于人體。通過化學方式對動物模型進行誘導，醋酸對于腸道的損傷解答且會破壞腸道菌群結構，醋酸誘導對用量要求極高，因此，在需要探討細菌性腸粘膜炎的病理機制和用藥劑量時，此類模型不具備代表性。

區別于化學誘導或轉基因方法，專利號為CN110013345A中國專利采用物理誘導，其提供了一種放射性結直腸炎動物模型的建立方法，包括將小鼠隨機分成兩個大組；正常喂養1～2周，讓小鼠適應新的生活環境；模擬照射時小鼠的體位，取平均值；制定放射治療計劃；依據分組設計不同，采用不同劑量梯度射線單次大劑量照射；評估結直腸組織病變嚴重程度。放射性結腸炎動物模型成膜規律，但大多對于普通輕慢性腸炎的疾病機理研究不具備典型性，主要用于探究腸炎產生和反復對腸道組織病變的影響。

基于病原菌誘導的動物模型建立，主要以通過口服、灌胃或皮下注射等方式對小鼠進行一定濃度的病原菌的接種。病原菌接種能夠使腸炎的發生更接近于自然狀態，有助于深入剖析病原菌與宿主相互作用的分子調控機制。為保證動物模型建立的典型性和可反復重復性，動物模型菌群接種對于接種位置、接種菌液濃度、接種方法等因素應具備可控性。為探究細菌性腸炎的誘因、病理機制以及臨床用藥等，需要一種由細菌菌群紊亂引起的腸炎動物模型。

此外，一方面由于對本領域技術人員的理解存在差異；另一方面由于發明人做出本發明時研究了大量文獻和專利，但篇幅所限并未詳細羅列所有的細節與內容，然而這絕非本發明不具備這些現有技術的特征，相反本發明已經具備現有技術的所有特征，而且申請人保留在背景技術中增加相關現有技術之權利。

發明內容