[發明專利]一種用于負載冠脈支架的細胞外納米囊泡，制備方法和應用

在審

• 申請號: 202110172994.5
• 申請日: 2021-02-08
• 公開（公告）號: CN112899224A
• 公開（公告）日: 2021-06-04
• 發明（設計）人: 高連如;張寧坤;陳宇;張燕
• 申請（專利權）人: 高連如
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775;A61K47/46
• 代理公司: 北京豐浩知識產權代理事務所(普通合伙) 11781
• 代理人: 李學康

本發明涉及細胞培養領域，具體講，涉及一種用于負載冠脈支架的細胞外納米囊泡，制備方法和應用。本發明的用于負載冠脈支架的細胞外納米囊泡為臍帶華通膠源間充質干細胞分泌的。本發明制備得到的來自臍帶華通膠源間充質干細胞的細胞外納米囊泡具有抗炎、再生和免疫調節功能，促進內皮細胞再生與微環境修復、抑制平滑肌細胞增殖，抗纖維組織增生，促炎癥型巨噬細胞向抗炎癥的M2轉化，保護靶病變內膜完整，實現了血運重建與預防支架內再狹窄及新生動脈粥樣硬化和血栓形成的同步化。

技術領域

本發明涉及細胞培養領域，具體講，涉及一種用于負載冠脈支架的細胞外納米囊泡，制備方法和應用。

背景技術

冠心病是威脅人類生命的第一殺手。經皮穿刺冠狀動脈介入治療(PCI)是冠心病治療的最重要手段。40多年來PCI術器材不斷進展，作為PCI核心技術成分-支架在不斷更新。盡管如此，支架置入后再發新冠狀動脈粥樣硬化(NA)及晚期血栓一直影響PCI術后中遠期療效。

證據表明，即使應用最新型藥物洗脫支架，光學相干斷層掃描(OCT)發現仍有27.4％～50％支架內新動脈粥樣硬化形成。臨床上甚至1/4患者需重復處理支架內新斑塊形成所致再狹窄。現硏究發現，二代藥物洗脫支架，如佐他莫司洗脫支架、依維莫司洗脫支架等雷帕霉素衍生物藥物洗脫支架，或新型無聚合物涂層藥物洗脫(西羅莫司、紫杉醇)支架，所產生的抑制內皮細胞、平滑肌細胞增殖的藥理效應，卻觸發了促動脈粥樣硬化發病核心機制，即氧化應激產物ROS增多，M1型炎癥巨噬細胞激活，大量氧化低密度脂蛋白內膜下堆積及被巨噬細胞吞噬。顯著降低細胞骨架銜接蛋白Nck，mTOR、rictor表達和mTORC2的形成，最終導致形成特色的支架內新動脈粥樣斑塊(Neoatherosclerosis，NA)，其特征為相對較薄的纖維帽和大量的黃色脂質積聚的粥樣易損斑塊。因此，晚期NA伴內膜破裂和血栓形成是晚期支架血栓形成的最常見機制，也與ST段抬高心肌梗死的高頻率發生有關。因此，目前臨床迫切需要革新于現有藥物洗脫支架的負載物。

鑒于此，特提出本發明。

發明內容

本發明的首要發明目的在于提供一種用于負載冠脈支架的細胞外納米囊泡。

本發明的第二發明目的在于提供該細胞外納米囊泡在用于制備冠狀動脈藥物負載支架中的應用。

本發明的第三發明目的在于一種冠狀動脈藥物負載支架。

本發明的第四發明目的在于提供該細胞外納米囊泡的制備方法。

為了完成本發明的發明目的，采用的技術方案為：

本發明提出一種用于負載冠脈支架的細胞外納米囊泡，所述細胞外納米囊泡為臍帶華通膠源間充質干細胞分泌的。

可選的，所述細胞外納米囊泡的制劑為凍干粉。

可選的，所述凍干粉中還含有賦形劑，賦形劑優選甘露醇、山梨醇、葡萄糖、乳糖中的至少一種，細胞外納米囊泡與賦形劑的重量比為1：50～5000，優選1：100～1000。

可選的，所述細胞外納米囊泡為采用采用含有細胞松弛素B的培養基對所述臍帶華通膠源間充質干細胞進行處理、然后分離得到。

可選的，所述細胞松弛素B的濃度為5～20μg/mL，優選10μg/mL；優選的，所述培養基選自DMEM培養基。

可選的，所述分離選自膜親和分離法分離；優選采用exoEasy旋轉柱進行分離。

本發明還涉及該細胞外納米囊泡在用于制備冠狀動脈藥物負載支架中的應用，優選的，所述細胞外納米囊泡完全替代化學藥物負載與所述支架內。

本發明還涉及一種冠狀動脈藥物負載支架，采用上述細胞外納米囊泡負載于支架的納米微孔道中，所述支架選自鈷鉻合金或鉑鉻合金。

本發明還涉及該細胞外納米囊泡的制備方法，至少包括以下步驟：