[發明專利]一種用于負載冠脈支架的細胞外納米囊泡，制備方法和應用

在審

• 申請號: 202110172994.5
• 申請日: 2021-02-08
• 公開（公告）號: CN112899224A
• 公開（公告）日: 2021-06-04
• 發明（設計）人: 高連如;張寧坤;陳宇;張燕
• 申請（專利權）人: 高連如
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775;A61K47/46
• 代理公司: 北京豐浩知識產權代理事務所(普通合伙) 11781
• 代理人: 李學康

1.一種用于負載冠脈支架的細胞外納米囊泡，其特征在于，所述細胞外納米囊泡為臍帶華通膠源間充質干細胞分泌的。

2.根據權利要求1所述的細胞外納米囊泡，其特征在于，所述細胞外納米囊泡的制劑為凍干粉。

3.根據權利要求2所述的細胞外納米囊泡，其特征在于，所述凍干粉中還含有賦形劑，賦形劑優選甘露醇、山梨醇、葡萄糖、乳糖中的至少一種，細胞外納米囊泡與賦形劑的重量比為1：50～5000，優選1：100～1000。

4.根據權利要求1所述的細胞外納米囊泡，其特征在于，所述細胞外納米囊泡為采用采用含有細胞松弛素B的培養基對所述臍帶華通膠源間充質干細胞進行處理、然后分離得到。

5.根據權利要求4所述的細胞外納米囊泡，其特征在于，所述細胞松弛素B的濃度為5～20μg/mL，優選10μg/mL；優選的，所述培養基選自DMEM培養基。

6.根據權利要求4所述的細胞外納米囊泡，其特征在于，所述分離選自膜親和分離法分離；優選采用exoEasy旋轉柱進行分離。

7.如權利要求1～6任一項所述的細胞外納米囊泡在用于制備冠狀動脈藥物負載支架中的應用，優選的，所述細胞外納米囊泡完全替代化學藥物負載與所述支架內。

8.一種冠狀動脈藥物負載支架，采用如權利要求1～6任一項所述的細胞外納米囊泡負載于支架的納米微孔道中，所述支架選自鈷鉻合金或鉑鉻合金。

9.如權利要求1～6任一項所述細胞外納米囊泡的制備方法，其特征在于，至少包括以下步驟：

S1、獲得臍帶華通膠源間充質干細胞；

S2、采用含有細胞松弛素B的培養基對所述臍帶華通膠源間充質干細胞進行處理；所述處理溫度優選為37℃，時間優選為20～40分鐘，

S3、分離所述細胞外納米囊泡。

10.根據權利要求9所述得制備方法，其特征在于，所述臍帶華通膠源間充質干細胞通過以下方法培養得到：

S11、取華通膠組織，剪碎后在平皿中進行組織貼壁培養；

S12、待細胞鋪滿瓶底80％后，清洗，制成細胞懸液，接種到3D水凝膠中，于37℃、體積分數為5％的二氧化碳、飽和濕度條件下擴增培養；

S13、待細胞融合80％時用水凝膠酶消化、洗滌，傳代，取第二、三代細胞在5％低氧細胞培養箱中培養10～18小時。