[發(fā)明專利]一種真姬菇HM13菌種的SSR標記指紋圖譜及其構(gòu)建方法與應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110171379.2
• 申請日: 2021-02-04
• 公開（公告）號: CN112795688B
• 公開（公告）日: 2023-02-28
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李燕;鮑大鵬;王瑩;吳瑩瑩;萬佳寧;尚俊軍
• 申請（專利權(quán)）人: 上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6858;C12Q1/04;C12N15/11
• 代理公司: 南京燦爛知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 32356
• 代理人: 王江南

本發(fā)明公開了一種真姬菇HM13菌種的SSR標記指紋圖譜及其構(gòu)建方法與應(yīng)用，包括該指紋圖譜由6對SSR標記組成。構(gòu)建方法包括：(1)菌絲培養(yǎng)；(2)基因組DNA的提取；(3)SSR分子標記的檢測；(4)毛細管電泳檢測。應(yīng)用包括：對真姬菇菌種進行SSR標記擴增，將得到的帶型與指紋圖譜對照，與該組指紋圖譜一致即為真姬菇HM13菌種。本發(fā)明與常規(guī)形態(tài)學(xué)檢測、拮抗試驗、出菇試驗相比，具有檢測時間短、準確性高、可重復(fù)性好的優(yōu)點，在收集的國內(nèi)外56個真姬菇栽培主栽菌種中具有真姬菇HM13菌種的專一性。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于真姬菇菌種的檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種真姬菇HM13菌種的SSR標記指紋圖譜及其構(gòu)建方法與應(yīng)用。

背景技術(shù)

真姬菇(拉丁文名Hypsizygus marmoreus(Peck)H.E.Bigelow)屬擔子菌門、傘菌綱、傘菌目、離褶傘科，因其菌蓋表面的大理石斑紋而得名。其外形美觀、質(zhì)地脆嫩、具有獨特的海鮮味且價格經(jīng)濟，受到廣大消費者喜愛。真姬菇不僅含有豐富維生素和18種氨基酸，近年研究還發(fā)現(xiàn)真姬菇中所含的小分子化合物、多糖和多肽等成分具有溶血、抗氧化、抑制白血病和淋巴瘤細胞、降血脂、抗炎和抗氧化等功能，是一種經(jīng)濟價值很高的食藥兼用菌。自從2001年我國第一家真姬菇工廠化栽培企業(yè)成立以來，真姬菇成為了我國市場發(fā)展較快的新型食用真菌之一。2019年中國真姬菇工廠化總產(chǎn)量為32.8萬噸，較2018年同比增長58.63％，占食用菌工廠化總產(chǎn)量的9.6％，在我國工廠化栽培食用真菌生產(chǎn)總量中排名第三。

優(yōu)質(zhì)菌種在真姬菇的工廠化栽培中起著舉足輕重的作用。目前，我國工廠化生產(chǎn)企業(yè)使用的真姬菇菌種主要為日本引入菌種或在其基礎(chǔ)上進一步雜交選育而成，栽培后子實體為棕色的稱為蟹味菇，子實體為白色的又稱白玉菇或玉龍菇。盡管工廠化生產(chǎn)的產(chǎn)量逐年提升，但部分菌種仍存在栽培周期長、單產(chǎn)低、單根子實體外觀整齊度差和易出現(xiàn)瘤蓋等問題，這些缺陷都可能導(dǎo)致生產(chǎn)成本的增加，降低產(chǎn)品的市場競爭力。另一方面，由于真姬菇工廠化生產(chǎn)菌株的多樣性不高，產(chǎn)品外觀近似，無法滿足市場消費者多樣化的需求。我國有著豐富的真姬菇野生和自然栽培資源，高效利用這些優(yōu)質(zhì)的資源，拓展菌株的遺傳基礎(chǔ)，有利于國內(nèi)高產(chǎn)、優(yōu)質(zhì)、特色真姬菇菌株的選育。

隨著《國際植物新品種保護法》的頒布實施，建立成熟、快速、精準的分子生物學(xué)鑒定技術(shù)體系成為保護食用菌品種知識產(chǎn)權(quán)的有力手段。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種真姬菇“HM13”菌種的SSR標記指紋圖譜及其構(gòu)建方法與應(yīng)用，該指紋圖譜與常規(guī)形態(tài)學(xué)檢測、拮抗試驗、出菇試驗相比，具有檢測時間短，準確性高，重復(fù)性好的優(yōu)點。

真姬菇(Hypsizygusmarmoreus)HM13，于2020年12月2日保藏于廣東省微生物菌種保藏中心，地址為廣州市先烈中路100號大院59號樓5樓，廣東省微生物研究所，保藏編號為GDMCC No:61412。

本發(fā)明的一種真姬菇“HM13”菌種的SSR標記指紋圖譜，該指紋圖譜由6對SSR標記組成，是基于真姬菇基因組簡單重復(fù)序列片段開發(fā)SSR引物，擴增帶型好，重復(fù)性高的SSR引物，標記詳細信息如表1：

表1 SSR標記詳細信息列表

本發(fā)明的一種真姬菇“HM13”菌種的SSR標記指紋圖譜的構(gòu)建方法，包括：

(1)菌絲培養(yǎng)：將真姬菇菌種轉(zhuǎn)接到馬鈴薯葡萄糖瓊脂固體培養(yǎng)基上，22℃培養(yǎng)10-14d后收集菌絲；

(2)基因組DNA的提取：利用真菌DNA提取試劑盒，按照試劑盒實驗步驟提取基因組DNA，并取2μL DNA進行1.2％瓊脂糖凝膠電泳檢測。紫外分光光度法檢測總基因組DNA濃度和純度，調(diào)整樣品DNA的濃度一致；

(3)SSR分子標記引物開發(fā)：根據(jù)真姬菇菌株的基因組重測序結(jié)果，選取多態(tài)性序列設(shè)計SSR引物并合成；