[發(fā)明專利]葉酸修飾氮摻雜石墨烯量子點/銀納米熒光探針的制備方法和應用有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 202110170167.2 | 申請日： | 2021-02-08 |
| 公開（公告）號： | CN112964683B | 公開（公告）日： | 2022-06-17 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 卞偉;鄭玲玲;楊學芳;李曉蓉;李雪冰;肖虹 | 申請（專利權(quán)）人： | 山西醫(yī)科大學 |
| 主分類號： | G01N21/64 | 分類號： | G01N21/64;B82Y40/00;B82Y15/00 |
| 代理公司： | 太原倍智知識產(chǎn)權(quán)代理事務所(普通合伙) 14111 | 代理人： | 張宏 |
| 地址： | 030001 *** | 國省代碼： | 山西;14 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 葉酸 修飾 摻雜 石墨 量子 納米 熒光 探針 制備 方法 應用 | ||
本發(fā)明涉及一種葉酸修飾氮摻雜石墨烯量子點/銀納米熒光探針的制備方法和應用。將檸檬酸、雙氰胺溶于超純水，反應獲得氮摻雜石墨烯量子點；將1?乙基?(3?二甲基氨基丙基)碳二亞胺、羥基琥珀酰亞胺、葉酸與PBS緩沖液混合均勻，在室溫及攪拌條件下，加入氮摻雜石墨烯量子點固體粉末，反應得到的葉酸修飾氮摻雜石墨烯量子點并將其分散于超純水中，超聲并加熱處理得到備用溶液；銀鹽的水溶液中滴加氨水，加熱后與上述備用溶液混合，加熱攪拌，反應完成后濾液經(jīng)冷凍干燥得葉酸修飾氮摻雜石墨烯量子點/銀納米固體粉末。本發(fā)明用于構(gòu)建同時測定Hg2+和GSH的開關(guān)型熒光探針，此外該探針可通過受體介導的內(nèi)吞作用靶向癌細胞成像。
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明屬于納米材料制備及應用技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種葉酸修飾氮摻雜石墨烯量子點/銀納米復合材料熒光探針的制備方法。
背景技術(shù)
重金屬離子中汞離子（Hg2+）是自然界最穩(wěn)定，最難降解的，也是毒性較大和最為普遍存在的離子之一，廣泛存在于水、土壤和食品中，它可以通過食物鏈的形式富集，導致Hg2+含量超標引起許多不良的生理和環(huán)境效應。谷胱甘肽（GSH）作為一種重要的生物硫醇，具有抗氧化性和解毒性，在人體可逆氧化還原反應、細胞信號轉(zhuǎn)導、解毒和代謝等方面有著重要的作用；但若體內(nèi)GSH水平異常會引起糖尿病、艾滋病、心臟病和癌癥等多種疾病，因此，檢測Hg2+和GSH含量是至關(guān)重要。
對于Hg2+含量檢測的方法包括電感耦合等離子體質(zhì)譜法（ICPMS）、原子吸收/發(fā)射光譜法、電化學法等；GSH含量分析的方法有電化學脈沖伏安法和高效液相色譜法等。在這些方法中ICPMS、高效液相色譜法和原子吸收光譜法雖具有優(yōu)良的準確性和選擇性，但對樣品的要求較高，儀器昂貴，耗時；電化學法雖儀器簡單、分析時間短但選擇性較差，這些不足限制了它們的應用。與上述方法相比，熒光法作為一種綠色安全有效的方法在物質(zhì)檢測中表現(xiàn)出獨特的優(yōu)勢，如可特異性識別目標物質(zhì)，對目標物質(zhì)響應時間短，檢測成本低等。
熒光成像具有價格低廉、成像快速的特點，且具有分子水平的敏感性單分子成像，能對腫瘤的生長進行靶向標記和示蹤。應用于熒光成像的腫瘤靶向探針能夠?qū)崿F(xiàn)在腫瘤組織中的選擇性蓄積，故而高選擇性靶向探針的構(gòu)建是靶向腫瘤成像研究的重點和難點。目前報道較多的腫瘤靶向探針主要是基于抗體、多肽、適配子等構(gòu)建的，這些探針通常存在成本高、免疫原性、親和力低、半衰期短等缺點，一定程度上限制了它們的應用。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種葉酸修飾氮摻雜石墨烯量子點/銀納米熒光探針的制備方法和應用，該熒光探針對Hg2+和GSH的檢測具有高選擇性、高靈敏度的特點；而且該熒光探針生物相容性好、低毒，可用于癌細胞靶向成像。
為解決以上技術(shù)問題，根據(jù)本發(fā)明的一個方面，提供一種葉酸修飾氮摻雜石墨烯量子點/銀納米熒光探針的制備方法，包括如下步驟：
步驟一，將檸檬酸（CA）、雙氰胺（DCD）溶于超純水，反應溫度為160~200℃，反應獲得的產(chǎn)物稀釋后過濾，將過濾后的溶液透析冷凍干燥得氮摻雜石墨烯量子點（N-GQDs）；
步驟二，將1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺（EDC）、羥基琥珀酰亞胺（NHS）、葉酸（FA）與PBS緩沖液混合均勻，在室溫及攪拌條件下，加入步驟一所述的氮摻雜石墨烯量子點（N-GQDs）固體粉末，將反應得到的產(chǎn)物離心，過濾，透析，最終冷凍干燥得到葉酸修飾氮摻雜石墨烯量子點（FA-N-GQDs）；
步驟三，取步驟二合成的葉酸修飾氮摻雜石墨烯量子點（FA-N-GQDs）固體粉末分散于超純水中，超聲處理并在溫度為40~60℃條件下加熱，備用；
步驟四，向銀鹽的水溶液中滴加30%的氨水，直至水溶液中沒有沉淀變?yōu)槌吻澹跍囟葹?0~60℃條件下加熱后備用；
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