[發(fā)明專利]葉酸修飾氮摻雜石墨烯量子點/銀納米熒光探針的制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110170167.2
• 申請日: 2021-02-08
• 公開（公告）號: CN112964683B
• 公開（公告）日: 2022-06-17
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 卞偉;鄭玲玲;楊學(xué)芳;李曉蓉;李雪冰;肖虹
• 申請（專利權(quán)）人: 山西醫(yī)科大學(xué)
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64;B82Y40/00;B82Y15/00
• 代理公司: 太原倍智知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 14111
• 代理人: 張宏

1.一種葉酸修飾氮摻雜石墨烯量子點/銀納米熒光探針的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

步驟一，將檸檬酸、雙氰胺溶于超純水，反應(yīng)溫度為160~200℃，反應(yīng)獲得的產(chǎn)物稀釋后過濾，將過濾后的溶液透析冷凍干燥得氮摻雜石墨烯量子點；

步驟二，將1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺、羥基琥珀酰亞胺、葉酸與PBS緩沖液混合均勻，在室溫及攪拌條件下，加入步驟一所述的氮摻雜石墨烯量子點固體粉末，將反應(yīng)得到的產(chǎn)物離心，過濾，透析，最終冷凍干燥得到葉酸修飾氮摻雜石墨烯量子點；

步驟三，取步驟二合成的葉酸修飾氮摻雜石墨烯量子點固體粉末分散于超純水中，超聲處理并在溫度為40~60℃條件下加熱，備用；

步驟四，向銀鹽的水溶液中滴加30%的氨水，直至水溶液中沒有沉淀變?yōu)槌吻澹跍囟葹?0~60℃條件下加熱后備用；

步驟五，將所述步驟三和步驟四配制好的溶液混合，溫度為40~60℃條件下加熱攪拌，反應(yīng)完成后過濾收集濾液，溶液經(jīng)冷凍干燥得葉酸修飾氮摻雜石墨烯量子點/銀納米固體粉末。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：步驟一中，所述的檸檬酸與雙氰胺的投料比為(1~3)：(0.5~1.5)。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：步驟二中，所述的1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺、羥基琥珀酰亞胺、葉酸、氮摻雜石墨烯量子點的投料比為1:(1~2):(2~3):(0.2~0.6)。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：步驟二中，PBS的pH值為7.0~7.8。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：步驟一和步驟二中，透析時，透析袋的截留分子量為500~1000 Da。

6.一種葉酸修飾氮摻雜石墨烯量子點/銀納米熒光探針，其特征在于：由權(quán)利要求1至5任一項所述的方法制備而成。

7.權(quán)利要求6所述的葉酸修飾氮摻雜石墨烯量子點/銀納米熒光探針在測定Hg²⁺或GSH中的應(yīng)用。

8.一種檢測Hg²⁺或GSH濃度的方法，其特征在于：

檢測Hg²⁺的濃度時，首先取權(quán)利要求6所述的葉酸修飾氮摻雜石墨烯量子點/銀納米熒光探針溶液，在溶液中加入不同濃度的Hg²⁺，用磷酸鹽緩沖溶液定容，在熒光儀下測定其熒光光譜；隨著Hg²⁺的濃度增加，該熒光探針的熒光發(fā)射強度逐漸下降，由此可制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，從而通過該探針熒光強度的變化檢測Hg²⁺的濃度；

檢測GSH濃度時，首先取Hg²⁺溶液和權(quán)利要求6所述的葉酸修飾氮摻雜石墨烯量子點/銀納米熒光探針溶液混合，在溶液中加入不同濃度的GSH，用磷酸鹽緩沖溶液定容，在熒光儀下測定其熒光光譜；隨著GSH的濃度增加，該體系的熒光發(fā)射強度逐漸升高，由此制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，從而通過該體系熒光強度的變化檢測GSH的濃度。

9.權(quán)利要求6所述的葉酸修飾氮摻雜石墨烯量子點/銀納米熒光探針在癌細(xì)胞靶向熒光成像中的應(yīng)用。

10.一種癌細(xì)胞靶向熒光成像方法，其特征在于：癌細(xì)胞孵育貼壁，然后將權(quán)利要求6所述的葉酸修飾氮摻雜石墨烯量子點/銀納米熒光探針加入細(xì)胞培養(yǎng)基，混勻，孵育細(xì)胞結(jié)束后，采用激光共聚焦顯微鏡在不同波長下拍攝細(xì)胞圖片，即完成癌細(xì)胞的靶向成像。